169353. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a p-klór-DL-fenilalamin kémiai rezolválására
3 169353 4 és az optikailag aktív aminosavat az oldatból közvetlenül pH = 5-nél kristályosítjuk. Az eljárással előállított p-klór-L-fenilalanin optikai forgatóképessége megegyezett az irodalomból ismert enzimatikus úton nyert termék értékével. Az optikailag aktív p-klór-fenilalaninból deutériummal, illetve tríciummal jelzett, optikailag aktív fenilalaninok állíthatók elő, amelyek segítségével a biokémia a különböző élő szervezetek életfolyamatait korszerű módszerekkel tanulmányozhatja. Példa: A rétegkromatográfiához DC-Alufolien Kieselgel (Merck) lemezt használunk. 1. N-acetil-p-klór-DL-fenilalanin (I) A fenti (I) vegyületet p-klór-DL-fenilalaninból (amelyet például Erlen meyer azlakton szintézissel készítünk), Greenstein módszere szerint állítjuk elő [Greenstein and Winitz: Chemistry of the Amino acids (N.Y., London.) Vol. III. p. 1831]. A leírt eljárástól eltérően az átkristályosítást metanolból vízzel végezzük. A rezolváláshoz tiszta (legalább egyszer kristályosított) N-acetil-p-klór-DL-fenilalanint használunk. Rf = 0,7-0,8 rendszer : etilacetát : piridin : : jégecet : víz = = 30:20:6:11 op. 180-183 C°. Elemanalízis: számított: C = 54,65%, H = 5,01%, N = 5,79%, Cl = 14,66%, talált: C =54,95%, H = 5,02%, N = 5,76%, Cl = 14,82%. 2. N-acetil-p-klór-L-fenilalanin-L(+)-treo-1 --(p-nitrofenil)-2-amino-l,3-propándiol só (II) 18,0 g N-acetil-p-klór-DL-fenilalanint és 15,3 g L(+)-treo-1 -(p-nitrofenil)-2-amino-l ,3-propándiol-t 100 ml forró vízmentes alkoholban oldunk. Az azonnal meginduló kristályosodás után még melegen 50 ml alkoholt adunk hozzá és 24 óra hosszat állni hagyjuk, (esetenként lehet rövidebb ideig is). A kivált sót szűrés után 300 ml forró vízből kristályosítjuk. A kívánt tisztasági fok eléréséhez a kristályosítást a kapott anyagtól függően 2^4-szer megismételjük. Kitermelés: 12,8 g (75%) op. 212-214 C° [a]l2 = +52° ± 3° (=1, víz). 3. N-acetil-p-klór-L-fenilalanin (III) 10,8 g (30,5 mmól) N-acetil-p-klór-L-fenilalanin-L(+)-treo-l-(p-nitrofenil)-2-amino-1,3-propándiol sót (II) vízben szuszpendálunk (kb. 50 ml), majd 120 ml In sósav-oldatot adunk hozzá lassú ütemben. Néhány órai állás után a kivált N-acetil-p-klór-L-fenilalanint szűrjük, hideg vízzel mossuk, vákuumban szárítjuk. Kitermelés: 4,5£ (78%) op. 149-153 C [a]£2=+50 o ±r (c=l, etanol). 5 4. p-klór-L-fenilalanin (IV) 4,4 g (22 mmól) N-acetil-p-klór-L-fenilalanint 3 n sósav oldatban 2 órán át visszafolyató hűtő alatt forralunk. Az oldatot forrón aktív szénnel derítjük, majd szűrjük és pH-ját tömény ammóniumhidroxid oldattal 5-re állítjuk. A kivált anyagot hűtés után szűrjük. Kitermelés: 2,8 g (78%) [a]?)20 = -230 ±l 0 (c = 0,5, víz), [a]l2 ° = +3,5° (c = 2, n sósav). Elemanalízis: 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 számított: C = 54,14%, H = 5,012%, N = 7,02%, Cl = 17,7%, talált: C = 54,13%, H = 5,06%, N = 7,02%, Cl = 17,76%. 5. N-acetil-p-klór-DL-fenilalanint tartalmazó N-acetil-p-klór-D-fenilalanin (V) Az N-acetil-p-klór-L-fenilalanin-L(+)-treo-1 -(p-nitrofenil)-2-amino-l,3-propándiol (II) só anyalúgját vákuumban bepároljuk. A visszamaradó sárga, olajos anyagot 50 ml forró vízben oldjuk, majd az oldat pH-ját tömény ammóniumhidroxid oldattal 1 l-re állítjuk. A lehűlésre kiváló L(+)-treo-l-(p-nitrofenil)-2-amino-l,3-propándiol-t a 0C°-ra hűtött szuszpenzióból néhány órai állás után szűrjük. A szüredéket 6n sósavval pH l-re savanyítjuk és a kristályosan kivált anyagot 0 C -on 12 órán át állni hagyjuk, szűrjük, vizes mosás után szárítjuk. Kitermelés: 5,6 g (62%) [aß2 = -38°(c = l, etanol). 6. N-acetil-p-klór-D-fenilalanin-D(-)-treo-l-(p-nitrofenil)-2-amino-l,3-propándiol só (VI) 4,8 g V-jelű vegyületet feloldunk 50 ml 50%-os forró etanolban, az oldathoz 4,24 g D(—)-treo-l-(p-nitrofenil)-2-amino-l,3-propándiol-t adunk. Az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, majd 12 órán át 0C -on állni hagyjuk. A kivált sót szűrjük, majd még egyszer forró vízből átkristályosítjuk. Lehűtjük és hidegen szűrjük. Kitermelés: 6,5 g (75%) op. 210-212 C [a\l2 =-51° (c=l, víz). 7. N-acetil-p-klór-D-fenilalanin (VII) 5,5 g VI-jelű diasztereomer sót 75 ml forró vízben feloldunk és az oldathoz 11 ml 6n sósavoldatot adunk. 0C -ra hűtjük, állni hagyjuk, szűrjük és vizes mosás után szárítjuk. Kitermelés: 2,6 g (86%) op,: 149-152 C [aß2 =-51° (c=l, etanol).
