169326. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására aktivészteres módszerrel katalizátorok hozzáadása útján
13 169326 14 2. táblázat folytatása MólekviAktívKatalivalens Reakció %D-Pheészter zátor katalizátor idő -L-Val OPcp 2-hidroxibenzotriazol 1,0 5 perc 27% OTcp 3-hidroxi-4--oxo-3,4-dihidrokinazolin 1,0 10 perc <2% OTcp 3-hidroxi-2--metil-4-oxo-3,4-dihidrokinazolin 1,0 10 perc <2% OTcp l-hidroxi-2--piridon 1,0 10 perc <2% 3. példa Nps-ne-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH a) Nps-Ile-aktívészter előállítása Nps-Ile-QTcp, illetve Nps-Ile-OSu és H-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH keverékéből kiindulva különböző N-hidroxi-vegyületek, mint katalizátorok, felhasználásával. 5 116,3 mg (0,2 mmol) H-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH • H20 2 ml dimetilformamidban készült oldatához 0,2 mmól N-hidroxi-vegyületet és 111 mg (0,22) Nps-Ile-OTcp-t illetve 89,2 mg (0,24 mmól) Nps-Ile-OSu-t adunk. Különböző idő-10 szakaszokban a reakcióoldatból 1 cseppet vékonyréteg szilikagél lemezre (Merck, „Kieselgel F 254") felviszünk. A lemezt 8:2 arányú metilénklorid-metanol eleggyel futtatjuk és ninhidrinnel előhívjuk. A 3. táblázatban adjuk meg a vizsgálat ered-15 menyeit. d) 3.táblázat Nps-Ile-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH szintézise 20 Nps-Ile-OTcp, illetve Nps-Ile-OSu és H-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH felhasználásával különböző N-hidroxi-vegyületek, mint katalizátorok jelenlétében 25 Észter N-hidroxi-vegyület Reakció vége (reakcióidő) Moláris mennyiségű Nps-izoleucint és triklór- 30 fenolt, illetve N-hidroxiszukcinimidet etilacetátban 0C°-on gyenge diciklohexilkarbodiimid (DCC) felesleggel reagáltatunk. Az elegyet 1 óra hosszat 0 C°-on, majd 3 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, a csapadékot leszívatjuk és a szűrletet 35 bepároljuk. A maradékot izopropanolból átkristályosítjuk. Nps-Ile-OTcp, olvadáspont: 95-97 C°.o Nps-Ile-OSu, olvadáspont: 105-108 C°. 40 b) Nps-Ile-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH 2,9 g (5 mmól) H-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH • •H20 [előállítható Chem. Ber. 103 2039 (1970), és 815 mg (5 mmól) l-hidroxi-5,6-dimetil-benzo- 45 -triazolt 25 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldathoz 2,32 g (5 mmól) Nps-Ile-OTcp-t adunk hozzá és 15 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk (15 óra leforgása után a kiindulási tripeptid vékonyrétegíkromatográfiás úton már nem 50 volt kimutatható). A reakció lezajlása után a reakcióelegyben H-Cys(Trt)Ser-Leu-OH nem lehet jelen, így a vékorryréteg-kromatogramon a ninhidrinnel előhívott próba teljes eltűnése tapasztalható. A dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk és 55 a maradékot nátriumhidrogénkarbonát oldattal eldörzsöljük. A csapadékot leszívatjuk és a szűrletet elöntjük. A csapadékot etilacetátban feloldjuk és 5%-os KHSO4 oldattal és vízzel kirázzuk, vízmentes nátriumszulfáttal megszárítjuk és bepároljuk. A 60 maradékot éterrel eldörzsöljük. A termék amorf. Hozam 3,6g (82%). [a]2, 2 =-23,5° (c=l, dimetilacetamidban). c) Az Nps-Ile-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH szintézisének vékonyréteg-kromatográfiai vizsgálata65 OSu 5 hét után megszakítjuk mert teljes átalakulás nem mutatható ki OSu 3-hidroxi-4-oxo-3,4--dihidro-kinazolin 5 hét után megszakítjuk, mert teljes átalakulás nem mutatható ki OTcp * 5 hét után megszakítjuk, mert teljes átalakulás nem mutatható ki OTcp 1-hidroxibenzotriazol kb. 15 óra OTcp 3-hidroxi-4-oxo-3,4--dihidro-kinazolin kb. 15 óra OTcp 3-hidroxi-2-metil-4-oxo-3,4-dihidrokinazolin kb. 7 nap OTcp 3-hidroxi-4-oxo-2--fenil-3,4-dihidro-kinazolin kb. 7 nap OTcp l-hidroxi-5,6-dimetil-benzo-triazol kb. 20 óra OTcp 1 -hidroxi-2-piridon kb. 20 óra OTcp l-hidroxi-4-metil-2-piridon kb. 20 óra OTcp l-hidroxi-2,4-dimetil-2-piridon kb. 4 nap 1
