169326. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására aktivészteres módszerrel katalizátorok hozzáadása útján
11 169326 12 hosszat szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a hidrobromidot *terfelesleggel kicsapjuk és kimossuk. Hozam: 3,5 g, olvadáspont: 216-219 C°. b) H-Phe-OPcp • HBr 5 5,47 g Z-Phe-OPcp-t I a) módszerrel analóg kezelünk. Hozam: 4,1 g, olvadáspont: 205 C° (bomlás közben). 10 c) H-Phe-OTcp -HBr 4,78 g Z-Phe-OTcp-t I a) módszerrel kezelünk. Hozam: 4,2 g, olvadáspont: 220 C° lás közben). d) Boc-Leu-Phe-ONp analóg (bom-15 2,49 g Boc-Leu-OH • 1 H20-t etilacetátban fel- 20 oldunk. Az etilacetátos oldatot nátriumszulfát felett szárítjuk, bepároljuk és a maradékot nagyvákuumban szárítjuk. A bepárlási maradékot 20 ml vízmentes tetrahidrofuránban feloldjuk és az oldatot —20 C -ra lehűtjük. Keverés közben jéghűtéssel 1,2 ml N-etilmorfolint adunk hozzá, végül 1,27 g klórhangyasav-izobutilészter kevés hideg tetrahidrofuránban készült oldatát csepegtetjük hozzá. A reakcióelegyet 10 percig —10 C -on keverjük, ezután 3,35 g HBr • H-Phe-ONp-t, végül 1,2 ml N-etilmorfolin 5 ml tetrahidrofuránban készült oldatát lassan hozzácsepegtetjük. A reakcióelegyet még 1 óra hosszat 0 C -on, 1 óra hosszat szobahőmérsékleten utókeverjük, a csapadékot leszívatjuk, a szűrletet bepároljuk és a maradékot izopropanollal eldörzsöljük. A hozam 3,77 g, olvadáspont: 150—152 C. Izopropanolos átkristályosítás után 3,10 g, olvadáspont 152-153 C°, [o]D = 32,2° (c= 1, dimetilacetamidban). 25 30 35 II. Általános előírás Boc-Leu-Phe-Val-OBu* előállítására Boc—Leu-Phe—aktívészterből 105 mg (0,5 mmol) H-Val-OBu* • Hcl 2,5 ml 0,2 mólos N-etilmorfolin/dimetilacetamid-elegyben készült oldatához hozzáadjuk a katalizálásra alkalmas adalékanyagot (1-hidroxi-benzotriazol vagy 2-hidroxi-piridin-nátriumsó) és 0,5 mmól megfelelő Boc-Leu-Phe-aktívésztert. (250 mg Boc-Leu-Phe-ONp, 313 mg Boc-Leu-Phe-OPcp, 279 mg Boc-Leu-Phe-OTcp.) Az elegyet a 2. táblázatban megadott ideig állni hagyjuk, 50 ml etilacetáttal felhígítjuk, az etilacetátos oldatot telített nátriumhidrogénkarbonát oldattal, 5%-os káliumhidroszulfát oldattal, telített nátriumhidrogénkarbonát oldattal és telített nátriumklorid oldattal kirázzuk, vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A maradékot a Chem. Ber. 103 788-798 (1970) és Chem. Ber. 99 1451-1460 (1966) előírásai szerint részben elhidrolizáljuk, trifluoracetilező-szerrel kezeljük és gázkromatográfiás meghatározásnak vetjük alá. A gázkromatográfiás racemizálási meghatározás eredményeit a 2. táblázatban foglaljuk össze. 40 45 50 e) Boc-Leu-Phe-OPcp 1,97 g Boc-Leu-OH- 1 H20, 0,93 ml N-etilmorfolin és 1,0 g klórhangyasav-izobutilészter keverékéből az 1 d) példával analóg módon kevert anhidridet készítünk, amelyet 1 d) példával analóg módon 3,55 g H-Phe-OPcp • HBr és 0,93 ml N-etilmorfolin keverékével reagáltatunk. Hozam: 3,35 g, olvadáspont: 145—147 C .Izopropanolos átkristályosítás után a hozam 2,11 g, olvadáspont 163-164 C°, [a]D = -29,l° (c=l, dimetilacetamidban). 0 Boc-Leu-Phe-OTcp 55 2,3 g Boc-Leu-OH • 1H20, 1,1 ml N-etilmorfolin és 1,17 g klórhangyasav-izobutilészter keverékéből az 1 d) példával analóg módon kevert anhidridet állítunk elő, amelyet az 1 d) példával analóg módon 3,6 g H-Phe-OTcp • HBr és 1,1 ml 60 N-etilmorfolin keverékével reagáltatjuk. Hozam: 3,7 g, olvadáspont: 143-145 C . Izopropanolos átkristályosítás után a hozam 3,2 g, olvadáspont: 150-151 C°, [a]D=-48,4° (c=l, dimetilacetamidban). 65 III. 2. táblázat Racemizálási kísérletek Boc-Leu—Phe-Val-OBu* szintézisénél Boc-Leu-Phe aktívészter és H-Val-OBu* felhasználásával acilező katalizátorok behatása alatt MólekviAktívészter Katalizátor valens katalizátor Reakcióidő % D-Phe-L-Val ONp --70 óra <2% ONp 2-hidroxi-piridin-Na 1,0 1 óra 3,7% ONp 1-hidroxi-benzotriazol 1,0 5 perc <2% ONp 1-hidroxi-benzotriazol 0,1 5 perc <2% OTcp --70 óra <2% OTcp 2-hidroxi-piridin-Na -1 óra <2% OTcp 1-hidroxi-benzotriazol 1,0 5 perc <2% OPcp --70 óra 40% OPcp 2-hidroxi-piridin 1,0 1 óra 40% 6
