169317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükoamiláz előállítására encomycopsis bispora tenyészetből
3 169317 4 A találmány célja az ismertetett eljárások hátrányainak kiküszöbölése. A találmány feladatául tűztük ki a 60 536 számú NDK és az 1 380 854 számú francia szabadalmakból kiindulva egy olyan eljárás kidolgozását, amellyel lehetővé válik az Endomycopsis törzset alkalmazva a tenyésztési időtartam egyidejű csökkentésével az enzimhozam növelése. Meglepő módon azt találtuk, hogy ha a 60 536 számú NDK szabadalom szerinti tenyésztési folyamatot kivitelezzük és a tenyésztés során az 1 380 854 számú francia szabadalom szerinti olajadalékokat, illetve zsírsavkeverékeket adagoljuk a táptalajhoz, amelyen az Endomycopsis bispora törzset tenyésztjük, lényegesen rövidebb tenyésztési idő alatt nagyobb glükoamilázhozamot érünk el. Kukoricalekvárt, KH2 P0 4 -ot, kukoricakeményítőt, valamint 0,5 - 5% növényi olajat, illetve állati eredetű zsírt tartalmazó táptalajt állítottunk össze és a tenyésztést a 60 536 számú szabadalom szerint kiviteleztük. Megállapítottuk, hogy a glükoamilázhozam megsokszorozódott, illetve 5-6 nap után olyan hozamot értünk el, amely megegyezett az 1 380 854 számú francia szabadalomban 15 nap tenyésztési idő után megadott eredménnyel. Az autoxidációs folyamatok meggátolására 500-2000 Mg/g, előnyösen 500-1000 Mg/g mennyiségben tokoferolt tartalmazó olajat adtunk a .tápközeghez vigyázva arra, hogy a tokoferol ne legyen fölöslegben és peroxidok ne legyenek az olajban kimutathatók. A táptalajban kukoricakeményítő helyett C-forrásként például gabona- és burgonya keményítőt, keményítőbomlástermékeket, keményítőfoszfátot, szitált kukoricalisztet vagy a glükóz-gyártásnál keletkező mellékterméket (Hydrolt) - magában vagy egymással kombinálva - alkalmazunk. Zsiradékként növényi olajokat, olajpogácsát és állati eredetű zsírokat, alkalmazunk, amelyek tokoferoltartalma (illetve a-adalék) 500-2000 Mg/g, előnyösen 500-1000 Mg/g- A legjobb aktivitásokat rizsből, repcéből, kukoricából vagy szójababból nyert olajjal érjük el. Disznózsír felhasználása esetén a zsírhoz tokoferolt kell adni. A találmány szerinti eljárással lehetővé válik, hogy a törzset a micélium fázisban tartsuk és csökkentett tenyész-10 tési időtartam alatt nagyobb enzimhozamot érjünk el, mint az eddigi eljárásokkal. Három-négy nap tenyésztési idő alatt (rázott tenyészet). 70-120 IE/ml tenyészoldat glükoamilázaktivitást és 5 napos tenyészetnél 130-180 IE/ml aktivitást mutattunk ki. Fermentorokban végzett 6 napos tenyésztés után 200 IE/ml tenyészoldat aktivitásnál nagyobb aktivitást mutattunk ki. A találmány szerinti törzs jellemzése: 15 20 a) A törzs gomba alakban, elágazó micéliummal nő. A hifák megosztottak és egymagvúak. Blasztosporák képződnek. b) A törzs nemcsak gomba alakban, hanem valódi sarjadzással szaporodó élesztő-alakban is előfordul. c) Cukortartalmú agarközegen a generációs idő 60-70 perc. d) Rázott kultúrában a micéliummassza a logaritmikus növekedési időtartam alatt az alkalmazott táptalajtól függően minden 2,5 - 4,5 óránként megkétszereződik. e) Wickerham-féle tápoldatban, mint aló tenyészetben a törzs tiszta, kevés vagy kis balszto-25» spórákkal rendelkező hifamicéliumokat képez. A növekedés a szubsztrátumban megy végbe. Felületi réteg nem képződik. f) Aszkuszok képződnek, amelyek rendszerint két tömlő alakú aszkosporát tartalmaznak. g) A cukrot nem erjesztik, h) A glükózt, maltózt és szaccharózt asszimilálják. i) Tárgylemezre felvitt tenyészeteknél valódi, számos blasztosporával rendelkező micélium képződik. A találmányt az alábbi példák illusztrálják. 30 35 40 45 1. példa Endomycopsis bispora négyhetes Wickerham-féle ferdeagar tenyészetből 3-4 ml oltószuszpenziót készítünk (fiziológiás konyhasó oldattal). Ebből 0,5 - 1 ml-t 20 ml Wickerham-féle táptalajhoz adunk és 48-72 órán át 25 C°-on inkubáljuk. Ebből a szuszpenzióból 1 ml-t egy 500 ml 1. táblázat Találmány szerinti kísérlet A 60 536 számú NDK szabaAz 1 380 854 számú dalom szerinti aktivitás francia szabadalom tenyésztési Egységek szerinti aktivitás időtartam ono/ml Egységek Egységek nap IE/ml++ ono/ml IE/ml ono/ml IE/ml 101,5 159,4 229,5 70 110 158 + 72,5 + 50 további növekedés nem mutatható ki + + 60 + 41,5 + nem mértük •H- nemzetközi egységek/ml
