169171. lajstromszámú szabadalom • Elljárás és reagens koleszetrin meghatározására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEIRAS Bejelentés napja: 1973. V. 15. (BO-1435) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1972. V. 17. (P 22 24 132.3) Közzététel napja: 1976. V. 28. Megjelent: 1978.1.31. 169171 Nemzetközi osztályozás: G01N 33/16 Feltalálók: dr. Gruber Wolfgang vegyész, Garatshausen, dr. Bergmeyer Hans Ulrich vegyész, Tutzing/Obb., Bernt Erich gyógyszerész, München, dr. Hagen Alexander vegyész, dr. Roeschlau Peter vegyész, Lang Gunter laboráns, dr. Beaucamp Klaus vegyész, Tutzing/Obb., Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás és reagens koleszterin meghatározására 1 A találmány tárgya eljárás szabad és kötött koleszterin meghatározására és reagens az eljárás végrehajtásához. A továbbiakban „szabad koleszterin"-en az észterázzal vagy lúgos hidrolízissel végzett elszappa- 5 nosítás nélkül mérhető koleszterint, ugyanakkor a „kötött koleszterin" kifejezésen az összes, fenti módon szabad koleszterinként nem detektálható koleszterinmennyiséget értjük. Ez csak elszappanosítás után válik a koleszterinoxidáz számára 10 hozzáférhetővé. Az összes koleszterintartalom a szabad és kötött koleszterintartalom összege. A koleszterin meghatározása igen jelentős az orvosi diagnosztika számára. A vér magas koleszterintükre az arterioszklerózis fontos kockázati 15 tényezője. Magas koleszterinértékeknél, tehát hiperkoleszterinémiánál koronária-elégtelenség és szívinfarktus gyakrabban lép fel, mint alacsonyabb koleszterinértékeknél. Hiperkoleszterinémia elősegíti az arterioszklerózis és koronáriamegbetegedések fel- 20 lépését és ezért korán fel kell ismerni, hogy a kezelés időben megkezdődhessék. Magas koleszterinértékek diabetes mellitus, vese-szindróma, hipotireózis és májbetegségek, így biliáris cirrózis esetében is gyakran találhatók. Ezért egy gyors és 25 megbízhatóan keresztülvihető koleszterinmeghatározási módszernek igen nagy a jelentősége. A koleszterinmeghatározás ismert és használható módszerei a Liebermann-Burchard reakción alapulnak. Eszerint a szabad és észterezett koleszterin 30 ecetsavanhidriddel és tömény kénsawal kékes zöld színű vegyületet képez, melynek színintenzitása arányos a koleszterinkoncentrációval és spektrofotometriásán lemérhető. Ennek az ismert eljárásnak azonban lényeges hibái vannak. Az eljárás fő hátránya, hogy nem specifikus. A Liebermann-Burchard reakció nem specifikus szteroid-reakció, és a koleszterinen kívül más szteroidokat is kimutat. Minthogy a plazmában például még 1-3% dihidrokoleszterin és 0,5—1,4% A7 -kolesztenol is jelen vari, egyéb szteroidok mellett, nem kívánatos nagy hiba adódik. Ezenfelül a reakciót a bilirubin és a hemoglobin zavarja, ami magas és így hamis pozitív koleszterinértékhez vezet. További hátrányt jelent még, hogy agresszív és maró reagensekkel kell dolgozni. A fenti módszereket C. Liebermann, Ber. Dtsch. Chem. Ges. 18, 1803 (1885), H. Buchard, Inaug.-Diss. Rostock 1889. és R. Richterlich, „Klinishce Chemie", Akademische Verlagsgesellschaft Frankfurt, S. 268 (1968) ismertetik. A 3 558 516 és 3 479 154 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírások kémiai koleszterin-meghatározási eljárásokat ismertetnek. Az 1151 868 számú nagybritanniai szabadalmi leírás készüléket ír le a különböző kémiai anyagok, többek között koleszterin meghatározására, azonban ugyancsak kémiai módszerrel. A találmány feladatát ezért koleszterin meghatározására szolgáló új eljárás és reagens létrehozása 169171
