169159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag aktív peptidek előállítására
13 169159 " 14 73—76 C°-on olvadó terméket, kapunk, amelynek Rf-értéke (szüikagélen, 5:3:2 arányú Am-Py-víz elegyben): 0,60. 2. Z-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 5 47,7 g fenti módon kapott észtert 336 ml metanolban oldunk és 12,5 ml hidrazin-hidrát hozzáadásával hidraziddá alakítjuk. A reakcióelegyet 0 C° hőmérsékleten 48 óra hosszat keverjük, majd 10 100 ml térfogatra bepároljuk, 475 ml hideg desztillált vizet adunk hozzá és a kivált terméket szűréssel elkülönítjük. Az így kapott dipeptid 178-181 C°-on olvad. IS 3. H-Glu(OtBu)-D-His-OMe - 2HC1 5,8 g Cl szerint kapott dipeptidet az A.2 példa szerinti módon hidrogénezünk, így 94%-os hozammal kapjuk a H-Glu(OtBu)-D-His-OMe • 2HC1 di- 20 peptidet, amelynek Rf-értéke (szüikagélen, 7:2:1 arányú Am-Fo-víz oldószer-rendszerben): 0,32. 4. Boc-Met-Glu(OtBu)-D-His-OMe 25 1,59 g Boc-Met-N2 H 3 hidrazidot az A.3. példában leírt módon aziddá alakítunk, majd ezt 2,35 g H-Glu(OtBu)-D-His-OMe • 2HC1 (C.3) vegyülettel kapcsoljuk. A reakcióelegyet 86 óra hosszat keverjük, majd 30 szárazra pároljuk. A maradékot vizes etilacetáttal felvesszük és a szerves oldószeres fázist vízzel négyszer mossuk. A maradékot szárítjuk és az etilacetátot elpárologtatjuk. A kapott olajszerű termék súlya 2,4 g Rf-értéke (szüikagélen, 4:1:1 35 arányú Bu-Ac-víz oldószer-elegyben): 0,74. 5. Boc-Met-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 A. C.4. szerint kapott tripeptidet a fentebb leírt 40 módszerrel hidraziddá alakítjuk. A kapott hidrazidot metanolban oldjuk és az oldatot tízszeres térfogatú vízbe öntjük. A kivált terméket elkülönít- • jük, Uy módon 1,3 g terméket kapunk, amelynek Rf-értéke (szüikagélen, Am-iPro-víz oldószer-rend- 45 szerben): 0,35. D) További D-His-peptidek előállítása 1. Boc-A-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 50 [A = ß-Ala, dezamino-Met, Gly, (a-Me)Ala, Val vagy Ala] a) Boc-0-Ala-Glu(OtBu)-D-His-OMe 55 0,61 g Boc-0-Ala-N2 H 3 10 ml dimetil-formamiddal készített oldatát 0 C° hőmérsékletre hűtjük és 1,3 írü tetrahidrofurános 4,85 n sósavoldatot adunk hozzá. Az elegyet -21 C°-ra hűtjük és 0,41 ml izoamü-nitritet adunk hozzá. A reakcióelegyet 60 7 percig keverjük, ez alatt végbemegy az azid képződése. A fenti módon kapott azid-oldatot hozzáadjuk 1,2 g H-Glu(OtBu)-D-His-OMe • 2HC1 10 ml dimetil-formamiddal készített és lehűtött oldatához. 65 A reakcióelegyet trietü-amin hozzáadásával 7,2 pH-értékre állítjuk, 0 C° hőmérsékleten 86 óra hosszat keverjük, majd szárazra pároljuk. A maradékként kapott olajszerű .terméket szüikagélen kromatografáljuk. 0,9 g terméket kapunk, amelynek Rf-értéke (szüikagélen, 4:1:1 Bu-Ac-víz oldószer-rendszerben): 0,73. b) Boc-|3-Ala-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 0,75 g fenti módon kapott észtert az A.4. példában leírt módon hidraziddá alakítunk. 0,7 g hidrazidot kapunk, amelynek Rf-értéke (szüikagélen, 10:4:5 arányú Am-iPro-víz oldószer-rendszerben): 0,29. c) a fent leírttal egyező módon állítjuk elő a megfelelő kiindulási anyagok egyenértékű mennyiségeiből az alábbi hidrazidokat (a megadott Rf -értékeket szüikagélen, a '10:4:5 arányú Am-iPro-víz, ületőleg a xjellel megjelöltet a 4:1:1 arányú Bu-Ac-víz oldószer-rendszerben határoztuk meg): Dezamino-Met-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 Rf X 0,48 Boc-Gly-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 Rf 0,31 Boc-(a-Me)Ala-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 Rf 0,28 Boc-Val-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 Rf 0,33 Boc-Ala-Glu(OtBu)-D-His-N2 H 3 ' Rf 0,32 2. Boc-Met-Gln-D-His-N2 H 3 A C) példában leírttal egyező módon a Boc-Met-N2 H 3 védett aminosav-hidrazidot a . H-Gln-D-His-OMe észterrel kapcsoljuk, amelyet a megfelelő *Z-védett peptidnek 10%-os palládiumos aktívszén-' -katalizátor jelenlétében történő hidrogénezése útján állítottunk elő. Ily módon a Boc-Met-Gln-D-His-OMe védett peptidésztert kapjuk, amelyet a szokásos módon közvetlenül a megfelelő hidraziddá alakítunk át. Az így kapott hidrazid Rf -értéke (szüikagélen, 10:4:5 Am-iPro-víz oldószer-rendszerben): 0,27. E) H-Phe-D-Árg-OH 1. Z-Phe-D-Arg(N02 )-OMe 12,8 g H-D-Arg(N02 )-OMe • HCl 200 ml dimetü-formamiddal készített oldatát +5 C9 hőmérsékletre hűtjük és 4,8 g trietü-amint adunk hozzá. A kivált trietü-amin-hidrokloridot kiszűrjük, majd a szűrlethez 20 g Z-Phe-ONP észtert adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 4 napig keverjük, majd a dimetü-formamid egy részét ledesztilláljuk és a maradékot 400 ml etilacetát-víz eleggyel hígítjuk. A szerves, oldószeres fázist elkülönítjük, vjzes 5%-os citromsavoldattal, majd- 0,1 n arnmóniurn-hidroxidoldattal, végül vízzel mossuk, azután szárítjuk és bepároljuk. 7
