169159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag aktív peptidek előállítására
15 169159 16 A bepárlási maradékot etilacetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. Az így kapott észter olvadáspontja 89-93 C°, Rf-értéke (szilikagélen, 8 : 2 arányú benzol—etanol oldószer-rendszerben): 0,62. Hozam: 15,2 g. 2. Z-Phe-D-Arg-(N02 )-OH 5 g fenti módon kapott dipeptidet dioxánban oldunk és 1,1 mólekvivalens mennyiségű nátrium-hidroxiddal elszappanosítjuk. A reakcióelegyet 2 óra hosszat keverjük, majd n sósavoldattal 2 pH-értékre savanyítjuk és tízszeres térfogatú vízzel hígítjuk. A képződött csapadékot tartalmazó reakcióelegyet 0 C° hőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük, majd a csapadékot szűréssel elkülönítjük. Ily módon 3,1 g terméket kapunk, amely 118-121 C°-on olvad bomlás közben Rf-értéke (szilikagélen, 8:2 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben): 0,11. 3. H-Phe-D-Arg-OH-acetát 1 g Z-Phe-D-Arg(N02 )-OH dipeptidet, amelyet a fenti 2. bekezdés szerinti módon állítottunk elő, 20 ml 90%-os ecetsavban oldunk, majd 100 mg 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk az oldathoz. Az elegyen keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk a hidrogénfelvétel befejeződéséig, majd a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk, a bepárlási maradékot terc-butanol és víz 1 : 1 arányú elegyében oldjuk és az oldatot liofilizáljuk. Ily módon 0,4 g dipeptid-acetátot kapunk, amelynek Rf-értéke (szilikagélen, 4 :0,75 :0,25 : 1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer-rendszerben): 0,21. 4. A fenti 3. bekezdésben leírttal egyező módon alakítjuk át az 1. bekezdés szerinti módon előállított Z-Phe-D-Arg(N02 )-OMe észtert H-Phe-D-Arg-OMe-acetáttá. Ennek Rf-értéke (szilikagélen, a 4 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer --rendszerben): 0,40. F) H-Phe-Lys(Boc)-OtBu 4,2 g Z-Phe-ONP észtert az E.l. példában leírttal egyező módon H-Lys(Boc)-OtBu-val kapcsolunk és így a Z-Phe-Lys(Boc)-OtBu dipeptidet kapjuk viszkózus olaj alakjában. E termék Rf-értéke (szilikagélen, a 9 : 1 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben): 0,57. Hozam: 79%. 'A H-Phe-Lys(Boc)-OtBu-dipeptidet 95%-os hozammal kapjuk a Z-Phe-Lys(Boc)-OtBu metanolos közegben, 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátor jelenlétében történő hidrogénezése útján. Ennek a dipeptidnek az Rf-értéke (szilikagélen, a 4:1:5 Bu-Ac-víz oldószer-rendszerben): 0,41. G) H-Phe-D-Lys(Boc)-OH 1. Z-Phe-D-Lys(Boc)-OBzl 17,7 g H-D-Lys(Boc)-OBzl • HCl hidrokloridból kiindulva, az E.l. példában leírttal egyező módon állítjuk elő a Z-Phe-D-Lys(Boc)-OBzl dipeptidet. Az etilacetátos oldat bepárlása után 72%-os hozammal kapjuk az olajszerű terméket, amelynek Rf -értéke (szilikagélen, a 9:1 arányú benzol-etanol oldószer-rendszerben): 0,54. 5 2. H-Phe-D-Lys(Boc)-OH 2-g Z-Phe-Lys(Boc)-OBzl 50 ml metanollal készített oldatához 0,4 g 10%'os palládiumos aktívig szén-katalizátort adunk és hidrogén-gázt buborékoltatunk az elegyen keresztül. 5 óra múlva a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. Az így kapott dipeptid Rf -értéke (szilikagélen, a 4 : 0,75 : 0,25 :1 arányú Bu-Py-Ac-víz oldószer -15 -rendszerben): 0,31. Hozam: 95%. H) H-Phe-N-(CH2 ) s -N-Boc I I H H 20 A Z-Phe-ONP és Boc-N-(CH2 ) s -NH 2 komponensek etilacetátban lefolytatott kondenzációja útján 25 kapjuk a Z-Phe-N<CH2 ) 5 -N-Boc terméket, amely I I H H 131-133 C°-on olvad. Metanolban történő hidrogénezéssel kapjuk 30 ebből a termékből a H-Phe-N-(CH2 ) s -N-Boc vegyü-I I H H letet, amelynek Rf-értéke (szilikagélen, a 4:1:5 arányú Bu-Ac-víz oldószerrendszerben): 0,23. A 35 Z-Phe-ONP kiindulási anyagra számított összhozam: 65%. K) H-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH és származékai 1. Z-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH 40 4,6 g Z-Phe-ONP 60 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 4,4 g H-Lys(Boc)-Trp-OMe észtert adunk, majd az elegyet 20 C° hőmérsékleten 20 óra hosszat keverjük, ezután 0,2 g 2-dimetil-45 amino-etilamint adunk az elegyhez, további 2 óra hosszat keverjük, majd bepároljuk. A maradékot 250 ml etilacetát-víz elegyben oldjuk, a kapott oldatot 5%-os vizes kálium-karbonát-oldattal, majd 0,5 n sósavoldattal, végül vízzel mossuk, majd az 50 elkülönített szerves oldószeres fázist vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. A szárítószer kiszűrése után kapott szűrletet szárazra pároljuk és a kapott olajszerű maradékot dioxánban azonnal elszappanosítjuk. Ebből a célból 55 6,54 g észtert 100 ml dioxánban oldunk és 11,8 ml 1,5 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá. Az elegyet 2 óra hosszat keverjük, majd 1,5 n sósavoldattal 7 pH-értékre semlegesítjük és a dioxánt vákuumban ledesztilláljuk. 60 A kapott maradékhoz vizes étilacetátot adunk és a vizes fázis pH-értékét (a két fázis szétválasztása nélkül) híg sósavval 2-re állítjuk. A szerves oldószeres fázist ezután elkülönítjük, vízzel mossuk és szárítjuk. Az oldószer vákuumban történő 65 elpárologtatása után olajszerű maradékot kapunk, 8
