169157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiai hatású peptidek előállítására
ii 169157 n "-^termék Rf-értéke 0,28 (szilikagél-lemezen, 10:4:5 arányú amilalkohol-izopropanol-víz elegyben). H) példa 5 H-Phe-Arg-Phe-Gly-OH • HAc előállítása 1. Boc-Phe-Gly-OBzl 14,5 g Boc-Phe-OH 135 ml metilénkloriddal ké- 1° szített oldatához keverés közben 9,93 g H-Gly-OBzl-HCl-t adunk. A kapott szuszpenzióhoz -5 C°on 7,1 ml trietilamint adunk. Az elegyet 5 percig keverjük, majd trietilaminnal (kb. 3 ml) pH = 7-7,2 értékre lúgosítjuk. Ezután az elegyet 15 -22C°-ra hűtjük, 10,1 g (49,3 mmól) diciklohexil-karbodiimid 55 ml metilénkloriddal készített oldatát adjuk hozzá, és az oldatot 1 órán át -20C°-on, majd 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyet hűtőszekrénybe helyez- 20 zük. A kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, vízzel, 0,1 n vizes sósavoldattal, ismét vízzel, végül telített vizes nátriumklorid'-oldattal mossuk, szárítjuk, és szárazra pároljuk. A mára- 25 dékot etilacetátból átkristályosítjuk. 13,1 g 130-132 C°-on olvadó Boc-Phe-Gly-OBzl-t kapunk, Rf = 0,86 (szilikagél-lemezen, 9 : 1 arányú benzol-etanol elegyben). 30 2. H-Phe-Gly-OBzl • HCl 12,5 g az 1. lépésben kapott peptidet 85 ml etilacetát, 33 ml nitrometán és 45 ml metilénklorid elegyében oldunk, és az oldathoz szobahőmérsék- 35 léten 54 ml 5,66 n etilacetátos sósavoldatot adunk. A reakcióelegyet keverjük, eredeti térfogatának felére bepároljuk, majd az elegyhez óvatosan körülbelül 250 ml vízmentes étert adunk. A kivált fehér, olajos anyagot elválasztjuk a folyadékfázistól, majd 40 éterrel el dörzsöljük. 10,1 g olajos anyagot kapunk. 3. Boc-Arg(N02 )-Phe-Gly-OBzl 45 10,03 g a 2. lépésben kapott olajos termék 100 ml dioxánnaí készített oldatához egymás után 4,3 ml trietilamint, 2,21 ml jégecetet és 9,75 g terc-butoxikarbonil-(nitro)-arginin-acetoximot adunk. Az elegyet 40 órán át szobahőmérsékleten keverjük, 50 majd vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 150 ml etilacetátban felvesszük, egymás után 0,1 n vizes sósavoldattal, vízzel, 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, vízzel és telített vizes nátriumklorid-oldattal mossuk, szárítjuk és bepárol- 55 juk. A maradékot dioxánból átkristályosítjuk. 13,5 g terméket kapunk. A kapott Boc-Arg(N02 )-Phe-Gly-OBzl körülbelül 66C°-on olvad (sűrű olajat képez). Rf = 0,35 (szilikagél-rétegen, 9 : 1 arányú benzol-etanol elegyben). 50 4. H-Arg(N02 )-Phe-Gly-OBzl • HCl 12,5 g, a 3. lépésben kapott peptidet 85 ml etilacetát és 40 ml nitrometán elegyében oldunk, és az 65 oldathoz 35,5 ml 5,7 n etilacetátos sósavoldatot adunk. Az elegyet a 2. lépésben leírt niódón kezeljük. 10,4 g terméket kapunk; A kapott H-Arg(N02 )-Phe-Gly-OBzl • HCl Rf értéke 0,66 (szilikagél-rétegen, 5:3:2 arányú amilalkohol-piridin-víz elegyben). 5. Boc-Phe-Arg(N02 )-Phe-Gly-OBzl 9,14 g, a 4. lépésben előállított peptid 35 ml dimetilformamiddal készített, 0CG -os ' oldatához 3,42 ml trietilamint adunk, majd az oldatot -20 C°-ra hűtjük. A kapott oldatot azonnal 6,8 g Boc-Phe-ONP 75 ml dimetilformamiddal készített -20 C°-os oldatához adjuk. Ä reakcióelegyet 1 órán át -20 C°-on, majd 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az aktív észter fölöslegének eltávolítása érdekében az elegyhez 147 mg 2-dimetilamino-etilamint adunk, és az elegyet 2 órán át keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk. Az olajos maradékot 200 ml etilacetát és 35 ml víz elegyében felvesszük. Az etilacetátos fázist egymás után 0,1 n vizes sósavoldattal, vízzel, 5%-os vizes káliumkarbonát-oldattal, vízzel és telített vizes nátriumklorid-oldattal mossuk. A képződött szilárd anyagot összegyűjtjük és vákuumban szárítjuk. Az etilacetátos fázist éterrel körülbelül 1 literre egészítjük ki, ekkor további szilárd anyag válik ki. 10,6 g 175-177 C°-on olvadó , Boc-Phe-Arg(N02 )-Phe-Gly-OBzl-t kapunk, Rf = 0,32 (szilikagél-lemezen, 9 : 1 arányú benzol: etilacetát elegyben). 6. H-Phe-Arg(N02 )-Phe-Gly-OBzl • • trifluoracetát 10,4 g, az 5. lépésben kapott vegyületet keverés közben 36 ml 10C°-os 90%-os trifluorecetsavban oldunk. A reakcióelegyet 1,5 órán át keverjük, majd erélyes keverés közben 400 ml éterbe öntjük. 2,5 óra elteltével a képződött gélszerű fehér anyagot vákuumban leszűrjük és éterrel mossuk. A kapott H-Phe-Arg(N02 )-Phe-Gly-OBzl-trifiuoracetát Rf-értéke 0,78 (szilikagél-lemezen, 4:3/4 : 1/4 : 1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Hozam: 92%. 7. H-Phe-Arg-Phe-Gly-OH • HAc 9,9 g, a 6. lépésben kapott peptidet 500 ml 90%-os ecetsavban oldunk, az oldathoz 1,8 g 10%-os palládium-csontszén katalizátort adunk, majd az elegybe 48 órán át keverés közben hidrogént vezetünk. A katalizátort kiszűrjük és jégecettel mossuk. A szűrletet vákuumban szárazra pároljuk, és a színtelen, olajos maradékot éterrel fedjük, majd 24 órán át 0 C°-on tartjuk. Kristályos H-Phe-Arg-Phe-Gly-OH-acetátot kapunk, Rf = 0,27 (szilikagél-lemezen 4:3/4:1/4:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Hozam: 62%. 6
