169136. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezoxi-amino-glükozidok előállítására amino-glükozidok dehidroxilezésével
9 169136 10 tartalmazhatnak — formájában adhatók be. Napi dózisuk általában 1—30 mg/kg emlősök, azaz például ember, szarvasmarha, sertés vagy patkány esetében, így például a 3'-dezoxi-neomicint tabletták formájában napi mintegy 4 mg/kg, a 3'-dezoxi- 5 -xilosztazint injekció formájában napi mintegy 20 mg/kg, míg .a 3'-dezoxi-ribosztamicint injekció formájában napi mintegy 20 mg/kg dózisban használjuk. A találmányt közelebbről az alábbi példákkal 10 kívánjuk megvilágítani. A példákban „Amberlite" márkanévvel említett gyantákat a Rohm and Haas Company, Ltd. Amerikai Egyesült Államok-beli cég állítja elő. 15 1. referenciapélda 250 térfogatrész 0,5 n vizes bárium-hidroxid-oldatban feloldunk 5,0 súlyrész butirozin A nevű vegyületet, majd a kapott oldatott visszafolyató 20 hűtő alkalmazásával 2 órán át forraljuk, és ezt követően lehűtjük. Az oldatot ezután 1 n kénsav- ' oldattal semlegesítjük, majd a képződött bárium-szulfát csapadékot centrifugálás útján eltávolítjuk. A felülúszó folyadékfázist 300 térfogatrész kation- 2 5 cserélő gyantával (Amberlite CG—50 — NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopra bocsátjuk. Az oszlopot vízzel mossuk és 0,2 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. A xilosztazint tartalmazó frakciókat (az aktív anyag meghatáro- 30 zása vékonyrétegkromatográfiásan történik) összegyűjtjük, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és liofilizáljuk, amikor is fehér por alakjában 3,8 súlyrész xilosztazint kapunk. Elemzési eredmények a C17H34H4O10 képletre: 35 Számított: C =44,93% H =7,54%, N = 12,33%, talált: C =44,23%, H = 7,53%, N = 12,10%. 40 Optikai forgatóképesség [ajo1 = +34° (koncentráció 1%, oldószer víz). A xilosztazin exakt kémiai megnevezése 0-/3-D-xilofuranozil(l->5)-0- [a-2,6-diamino-2,6-didezoxi-D- 45 -glükopiranozU(l-»4)]-2-dezoxi-sztreptamin és az I képlettel jellemezhető. 2. referenciapélda 50 3% polipeptont (kazein hasnyálmirigyes kivonata, gyártó cége a Daigo Nutritive Chemicals, Ltd. japán cég), 1% húskivonatot és 0,5% nátrium-kloridot tartalmazó folyadékot (pH értéke 7,2) beoltunk a Bacillus sp. Y-399 mikroorganizmussal, 55 amely letétbe van helyezve ATCC—21932 szám alatt az American Type Culture Collection törzsgyűjteményben (Maryland állam, Amerikai Egyesült Államok) és FERM-P No. 1479 szám alatt a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial 60 Science and Technology törzsgyűjteményben (Chiba város, Japán). A tenyésztést rázás közben 28 C°-on 40 órán át végezzük. Az így kapott tenyészettel ezután beoltunk egy 30 000 térfogatrész térfogatú vizes kö- 65 zeget (pH értéke 7,5), amely 1% glükózt, 1% polipeptont, 0,7% húskivonatot és 0,5% magnézium-kloridot tartalmaz. A vizes közeg egy 50 000 térfogatrész kapacitású tartályba van töltve, míg a beoltás aránya 10%. A tenyésztést ezután 28 C°-on 100%-os levegőztetés és 200 fordulat/perc sebességű keverés mellett 66 órán át végezzük. A kapott fermentlé pH értékét 1 és 2 közé beállítjuk oxálsav telített vizes oldatával, majd szűrjük 300 súlyrész Hyflo-Super-Cel márkanevű szűrőanyagon (gyártó cége a Johns-Manville Products Co. cég). A szűrlet pH értékét 7-re beállítjuk, majd a szűrletet 2000 térfogatrész kationcserélő gyantával (Amberlite IRC-50-NH4+ ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopon bocsájtjuk keresztül, amikor is a Bacillus subtilis PCI 219 ellen hatásos termék az ioncserélő gyantán adszorbeálódik. A gyantát először vízzel mossuk, majd 5%-os vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az aktív frakciókat (2500 térfogatrész) összegyűjtjük, majd 600 térfogatrész kromatográfiai minőségű aktívszénnel töltött oszlopon bocsátjuk keresztül a termék adszorbeálására. A szénnel töltött oszlopot először vízzel mossuk, majd 0,3 n sósavoldattal eluáljuk. Az aktív frakciókat, összegyűjtjük, majd anioncserélő gyantával (Amberlite IR 45-OH-ionokkal töltött állapotban) semlegesítjük és csökkentett nyomáson betöményítjük. Végül a koncent^ rátumot liofilizáljuk, amikor is mintegy 30% xilosztazint tartalmazó nyers port kapunk 5,6 súlyrész mennyiségben. A kapott 5,6 súlyrésznyi nyersport vízben feloldjuk és 100 térfogatrész kationcserélőgyantával (Amberlite CG-50 - NH4 + ionokkal töltött állapotban töltött oszlopon adszorbeáltatjuk. Az oszlopot először vízzel mossuk, majd 0,2 n vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. Az aktív frakciókat összegyűjtjük, majd csökkentett nyomáson betöményítjük. A koncentrátumhoz térfogatára vonatkoztatva tízszeres mennyiségű acetont adunk, majd a képződött csapadékot kiszűrjük. így 1,8 súlyrész halványsárga port kapunk (mintegy 90% xilosztazint tartalmaz). Ezt a port vízben feloldjuk, majd 200 térfogatrész kationcserélő gyantával (CM-Sephadex C-25 - NH4 + ionokkal töltött állapotban) töltött oszlopon adszorbeáltatjuk. Az oszlopot vizes ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk gradiens-eluálást (0 és 1,7 közötti normalitású oldatokat használunk) alkalmazva. A kizárólag xilosztazint tartalmazó aktív frakciókat összegyűjtjük, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, amikor is 1,41 súlyrész fehér xilosztazin-port kapunk. 1. példa 1,0 súlyrész xilosztazin-3'-foszfát (előállítását az alábbiakban még ismertetjük), 0,7 súlyrész trifenil-foszfin, 9 térfogatrész trimetil-szilil-klorid, 4 térfogatrész hexametil-diszilazán és 7,5 térfogatrész piridin keverékét 110C°-on tartjuk 43,5 órán át, majd jeges hűtés közben a reakcióelegyet 200 térfogatrész metanolhoz adjuk, és ezt követően a metanolos elegyet csökkentett nyomáson szárazra párol-5
