169098. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(5-amino-5-karboxivaleramido)- 3-acetoximetil-3-cefem -4-karbonsav fermentléből való kinyerésére
5 169098 6 négyszer extraháljuk 1/6 térfogat etil-acetáttal. Az egyesített kivonatokat telitett vizes nátrium-kloridoldattal mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, derítőszénen átszűrjük és körülbelül 1 liter térfogatra bepároljuk. Az oldathoz pH 6-ig nátrium-etil-hexanoátot adunk. A lehűléskor kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük, és a szűrőn petroléterrel mossuk. Az N-(p-nitro-benzoil)-cefalosporin C termék tisztásági foka már kielégítő, de metanol/izopropanol 1 :3 elegyből átkristályosíthatjuk. Ekkor 85,5 g terméket kapunk, a szárítási veszteség 4,56% (a vízmentes anyagra számított kitermelés 90%). Szárítás után a termék fizikai jellemzői a következők: [a]?)0 =+99,6 [c=l% (súly per térfogat) vízben]. >W=264mM Eltm= 306,5 (vízben). 2. példa Az 1. példa szerint előállított N-(p-nitro-benzoü)-cefalosporin C tömény etil-acetátös oldatát izopropil-éterrel hígítjuk. A hűtéskor képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük, és izopropanol/petroléter elegyből kétszer átkristályosítva 67,2 g (80%) cefalosporin C-N-(p-nitro-benzoát)-ot kapunk. Fizikai jellemzői: [a]f)° =+78,3 [c= 1% (súly per térfogat) metanolban] Xm >x=264mM Ei cm= 348 (metanolban). Elemzés C23 H24N 4 OiiS képletre: Számított: C = 48,90%, H = 4,20%, N = 9,9%, S = 5,60%, Talált: C =48,15%, H =4,25%, N = 9,6%, S =5,36%. A nyersterméket nem kristályosítjuk ki a szabad sav kinyerése céljából, hanem a megfelelő nátriumsóvá alakítjuk át úgy, hogy a nyersterméket acetonban oldjuk, majd nátrium-etÜ-héxanoátot adunk hozzá. A kitermelés 85%. 3. példa 93,8 g (0,226 M) cefalosporin C-t tartalmazó 50,4 liter szűrt fermentléhez 2,5 liter etil-acetátot adunk és 10% nátrium-karbonát-oldat hozzáadásával a pH-t 7,5-re állítjuk be. A keverékh:z 5 liter etil-acetátban oldott 294 g (1,58M) p-nitro-benzoil-kloridot adunk. A hozzáadás alatt a pH-t állandóan 7-7,7 között tartjuk nátrium-karbonát hozzáadásával és a hőmérsékletet 5-10 C° között tartjuk. 30 perc keverés után 30% kénsavval az elegy pH-ját 5-re állítjuk be és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist elöntjük és a vizes fázist pH 2-ig megsavanyítjuk, majd 4 liter etil-acetáttal ötször extraháljuk. A szerves kivonatot magnézium-szulfáton víztelenítjük, és szobahőmérsékleten, vákuumban kis térfogatra bepároljuk. Körülbelül 3 térfogat izopropil-étert hozzáadva szilárd csapadék válik ki, melyet 0 C°-on 2 óráig állni hagyunk. Leszűrve 140 g nyers N-(p-nitro-benzoil)-5 -cefalosporin C-t kapunk (75% tisztaság). A tiszta anyagra számított kitermelés 87%. A termék további tisztítás nélkül alakítható át 7-amino-cefalosporánsawá. 4. példa 72 g cefalosporin C-t tartalmazó 20 liter szűrt fermentlevet p-nitro-benzoil-kloriddal reagáltatunk 15 és a 3. példában leírtak szerint extrahálunk. A szerves kivonatot magnézium-szulfáton víztelenítjük és vákuumban kis térfogatra bepároljuk. 43,2 g N,N-dimetil-benzil-amint adva az oldathoz csapadék válik ki. Az oldatot tovább töményítjük és 0C°-on 20 2 óráig állni hagyjuk. A szilárd csapadékot leszűrve az N-(p-nitro-benzoil)-cefalosporin C N,N-dimetilbenzil-amin-sóját kapjuk (139g). A só 80% tisztaságú és magas kitermeléssel közvetlenül átalakítható 7-amino-cefalosporánsawá. A tiszta anyagra számí-25 tott kitermelés 92%. Az N-(p-nitro-benzoil)-cefalosporin C N,N-dimetil-benzil-amin-sójának fizikai jellemzői: WD° =+63,2 [c=l% (súly per térfogat) meta-30 nolban] ^max = 263 mii El cm = 283 (metanolban). 35 5. példa 22,5 g cefalosporin C-t (9Ö0/ig/ml) tartalmazó 25 liter fermentlevet 70 g p-nitro-benzoü-kloriddal reagáltatunk és a reakcióterméket a vizes közegből 40 a 3. példában leírtak szerint vonjuk ki. A kitermelés 34,4 g nyers N-(p-nitro-benzoil)-cefalosporin C (80% tisztaság). A tiszta anyagra számított kitermelés 90%. 6. példa Az N-(p-nitro-benzoil)-cefalosporin C 4. példa szerint előállított 50 g (80% tisztaság) N,N-dimetil-50 -benzil-amin-sóját 500 ml vízmentes diklór-metánban szuszpendáljuk és 10 ml trietil-amint és 9 ml N,N-dimetil-anilint adunk hozzá. Az elegyhez szobahőmérsékleten 48 ml trimetil-klór-szilánt adunk. 1 óra múlva újra hozzáadunk 48 ml N,N-dímetil-55 -anilint és az oldatot lehűtjük -60 C°-ra. Ezután hozzáadunk 37,5 g foszfor-pentakloridot és a hőmérsékletet 2 óráig -40 C°-on tartjuk. A reakció végbemenetele után az elegyet -70 C°-ra hűtjük le és 12 ml N,N-dimetil-anilint tartalmazó 360 ml víz-60 mentes butanolt adunk hozzá, és a hőmérsékletet további 2 óráig -40 C°-on tartjuk. A reakcióelegyet ezután 320 ml víz és 180 ml metanol „elegyébe öntjük és ammónium-hidroxid hozzáadásával a pH-t 3,5-re állítjuk be. Éjszakán át 5 C°-on állni hagy-65 juk és a kivált csapadékot leszűrjük. 3
