168890. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására
27 168890 28 tetrahidrofurános sósavoldatot adunk. Az elegyet —20 C°-ra hűtjük, 0,27 ml izoamilnitritet adunk hozzá, és az elegyet néhány percig keverjük. A kapott oldatot 8 ml dimetilformamidban oldott 2 mmól D-H-Phe-Arg-Trp-OH-acetáthoz adjuk, 5 és az elegyet trietilaminnal pH = 7,3 értékre semlegesítjük. A reakcióelegyet 70 órán át 0C°-on keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot szek-butanol-kloroform 2 :3 elegyében felvesszük. Hozam: 54%. 10 A szerves fázist vízzel mossuk, szárítjuk, szűrjük, majd petroléterrel elegyítjük. A peptid szilárd alakban kiválik. Rf = 0,52 (szilikagél-rétegen, 4 :0,75 : 0,25 :1 arányú butanol-piridin—ecetsav-víz elegyben). 15 F) Eoc-Gly-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-OH 2 mmól Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 -t 20 (a megfelelő metilészterből hidrazinhidráttal előállított termék) az E) lépésben leírt módon H—Phe-Arg-Trp-OH-val kapcsolunk. A reakcióelegyet 70 órán át keverjük, majd 100 ml szek-butanol—kloroform 2 :3 arányú elegyébe öntjük, és vizes 25 nátriumklorid-oldattal kétszer extraháljuk. A szerves fázist szárazra pároljuk. A maradékot 9:1 arányú vízmentes etilacetát—petroléter eleggyel eldörzsöljük, majd szárítjuk. 214-217 C°-on bomlás közben olvadó terméket 3.0 kapunk, Rf = 0,48 (szilikagél-rétegen, 4 : 0,75 :0,25 :1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Hozam: 50%. G) A fenti eljárással állítjuk elő a következő vegyületeket: 35 1. Boc-Val-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,49 2. Boc-/3-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf =0,48 4 " 3. Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,52 4. Boc-(a-Me)Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,54 5. dezamino-Met-Glu(OtBu)-His- 45 -Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,48 Az Rf-értékeket szilikagél-rétegen, 4 :0,75 : 0,25 :1 arányú butanol-piridin-ecetsav—víz elegyben határoztuk meg. 50 H) Az E), F) és G) lépésekben előállított peptidek védőcsoportjait a 2. példa G) lépésében leírt módon lehasítjuk. A következő peptidek acetátjait kapjuk: 55 1. H-Val-Glu-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,20 2. H-Gly-Glu-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,18 3. H-0-Ala-Glu-His-Phe-Arg- 60 -Trp-OH Rf = 0,19 4. H-D-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,19 5. H-Ala-Glu-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,20 65 6. H-(a-Met)Ala-Glu-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,21 7. dezamino-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-OH Rf = 0,23 Az Rf-értékeket szilikagél-rétegen, 4:0,75*: : 0,25 :1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben határoztuk meg. 16. példa H-A-Glu-His-Phe-Lys-Trp-OH előállítása [A = -D-Met, dezamino-Met-, -D-Met(->- O), dezamino-Met(->- O)] A) Z-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH 2,1 g Z-Phe-ONP-t a 13. példa C) lépésében leírt módon 2,24 g H-Lys(Boc)-Trp-OMe-vel kapcsolunk. Az olajos észtert elkülönítjük, majd 10 ml metanolban 1,1 mólekvivalens nátriumhidroxiddal elszappanosítjuk. A reakcióelegyet megsavanyítjuk, és a kapott terméket metanol és víz elegyéből átkristályosítjuk. 2,61 g Z-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH-t kapunk, Rf = 0,23 (szilikagél-rétegen, 8 : 2 arányú benzol-etanol elegyben). B) H-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH Az A) lépésben kapott tripeptid-származékot hidrogénezzük. Kvantitatív hozammal kapjuk a habszerű nyers terméket, amelyet víz és metanol elegyéből átkristályosítunk. A kívánt tripeptidet 71%-os hozammal kapjuk. Rf = 0,05 (szilikagél-rétegen, 8 :2 arányú benzol-etanol elegyben). C) R-Glu(OtBu)-His-Phe-Lys(Boc)-Trp-OH (R = dezamino-Met- vagy Boc-D—Met-) A B) lépésben kapott tripeptidet a 7. példában ismertetett azid-módszerrel az R-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 általános képletű peptiddel kapcsoljuk (R = dezamino-Met vagy Boc-D-Met-csoport). A dimetilformamidos oldatot tízszeres mennyiségű, ecetsavval pH = 3-4-re savanyított vízbe öntjük. A kivált csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk. A pepiidet 55-60%-os hozammal kapjuk, amorf szilárd anyag alakjában. D) R-Glu-His-Phe-Lys-Trp-OH (R = dezamino-Met- vagy H-D-Met-) A C) lépésben kapott peptidek védőcsoportjait a 2. példa G) lépésében ismertetett eljárással lehasítjuk. A megfelelő peptidek acetát-sóit kapjuk. A H-D-Met-peptid Rf-értéke 0,21,. míg a dezamino-Met-peptid Rf-értéke 0,25 (szilikagél-rétegen, 4 :0,75 :0,25 :1 arányú butanol-piridin-ecetsav—víz elegyben). 14
