168890. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag hatásos peptidek előállítására
29 168890 30 E) R-Glu-ffis-Phe-Lys-Trp-OH előállítása (R = dezamino-Met(->- O) vagy H-D-Met(-> 0) A D) lépésben kapott peptideket az 1. példában leírt módon, ecetsavas közegben 30%os hidrogénperoxiddal oxidáljuk. A D-Met(-> 0)-peptid Rr értéke 0,19, a dezamino-Met(->-0)-peptid Rf-értéke 0,22 (szilikagél-rétegen, 4 :0,75 :0,25 :1 arányú butanol-piridin—ecetsav—víz elegyben). 19. példa H-Met(->0)-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH A H-Met-Glu-His-Phe-Arg-Gly-OH-t az 1. példában leírt módon oxidáljuk, majd liofilizáljuk. A termék Rf-értéke 0,16 (szilikagél-rétegen, 4 :0,75 :0,25 :1 arányú butanol—piridin—ecetsav—víz elegyben). 10 17. példa H-Met(-> 0)-Glu-His-Phe-Arg-Trp-OH és H-Met(-» 0)-Glu-His-Phe-Lys-Trp-OH előállítása A H-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-OH-t, illetve a H-Met-Glu-His-Phe-Lys-Trp-OH-t az 1. példában leírt módon, ecetsavas közegben 30%-os hidrogénperoxiddal oxidáljuk. A kapott szulfoxidokat ellenáramú megosztással tisztítjuk, oldószerként 4:1:5 arányú butanol-ecetsav-víz elegyet használunk. Az Arg-peptid szulfoxidjának Rf-értéke 0,20, míg a Lys-peptid szulfoxidjának Rfértéke 0,17 (4 :0,75 :0,25 :1 arányú butanol-piridin—ecetsav-víz elegyben). 18. példa H-A-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH általános képletű peptidek előállítása 35 [A = -D-met-, -D-Met(->- O)-] A)Boc-D-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH 20. példa H-Met(-+ 02 )-Glu-His-Phe-Lys-Trp-Gly-OH-15 acetát 200 mg H-Met-Glu-His-Phe-Lys-Trp-Gly-OH-t 0,5 ml víz, 0,1 ml 4 n perklórsav, 0,02 ml 0,5 m ammóniummolibdát-oldat elegyében oldunk, 20 és az oldathoz 0,06 ml 30%-os hidrogénperoxidot adunk. Az elegyet 2 órán át körülbelül 10 C°-on keverjük. Az elegyet szűrjük, és a szűrletet liofüizáljuk. 25 A termék Rf-értéke 0,21 (szilikagél-rétegen, 4:1:1 arányú butanol—ecetsav-víz elegyben). Hozam: 85%. (Tisztaság: 65%.) Hasonlóan állítjuk elő a következő vegyületet: 30 dezamino-Met(->-02)-Glu-His-Phe-OH, hozam: 90%, (tisztaság: 100%) Rf = 0,30 butilalkohol-piridin-ecetsav-víz 4:3/4:1/4:1 arányú elegyével Si02 -n. 21. példa H-Met(dH>0)-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH 40 előállítása A Boc-D-Met-Glu(OtBu)-His-N2 H 3 -t a 9. példa B) lépésében leírt módon H-Phe-Arg-Trp-Gly-OH-acetáttal kapcsoljuk. A termék Rf-értéke 0,49 (szilikagél-rétegen, 4 : 0,75 :0,25 :1 45 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). B) H-D-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH Az A) lépésben kapott peptid védőcsoportjait a 50 2, példa G) lépésében leírt módon lehasítjuk. H-D-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH-acetátot kapunk. Rf = 0,16 (szilikagél-rétegen, 4 :0,75 :0,25 :1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). 55 C) H-D-Met(->- 0)-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH A B) lépésben kapott peptidet az 1. példában 60 leírt módon, ecetsavas közegben 30%-os hidrogénperoxiddal oxidáljuk, majd a terméket liofüizáljuk. A termék Rf-értéke 0,14 (szilikagél-rétegen, 4 :0,75 :0,25 :1 arányú butanol-piridin-ecetsav—víz elegyben). 65 A) Boc-Met(d,-> 0)-OSu 26 g L-metionint a megfelelő szulfoxid-vegyületté oxidálunk [lásd: Toennies és Kolb: Biol. Chem. 128, 399 (1939)]. 24 g, 250C°-on bomlás közben olvadó terméket kapunk. A diasztereomer szulfoxidokat Lavine módszerével [J. Biol. Chem. 169, 477 (1947)] rezolváljuk. 8,7 g L-metionin(d,-»0)-t [aß 2 = +110° (c=l, vízben) és 1,8g L-metionin(l,->- 0)-t [aß2 = -75° (c = l, vízben) kapunk. A kapott izomereket ismert módon Boc—N3 -dal reagáltatva Boc-származékaikká alakítjuk. A termékek fizikai állandói a következők: Boc-Met(do ,-> 0)-OH: op.: 135-137 C°, [a]" = +42° (c = 1, dimetilformamidban), Boc-Met(l,-> 0)-OH: op.: 68 C°, [aß 2 = -58° (c = 1, dimetilformamidban). Az így kapott vegyületeket diciklohexil-karbodiimiddel és HOSu-val reagáltatjuk. A kapott N-hidroxi-szukcinimid-észtereket közvetlenül felhasználjuk a következő kapcsolási reakcióban. 15
