168850. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hisztaminopexiás hatású glükoproteinek előállítására

13 168850 14 Hasonló térfogatú mintasorozatot készítünk az F 947 jelű termékből is. Az 1%-os agaróz-tartalmú gélt olyan mennyiségű humán antialbumin nyúlszérummal (Behringwerke, 5 T 1585 AZ) elegyítjük, hogy 0,5%-os koncentrációjú gélt kapjunk. A futtatást 2 órán keresztül 7,5 V/cm potenciálkülönbség mellett végezzük. 10 Eredmény: Az albumin-ménnyiség a vizsgálat során 0,182 Mg. Ebből következik, hogy az idegen albu- 15 min koncentrációja a termékben 1,1 ezrelék. Megállapítható továbbá: - a termékben az albumin-szennyeződés olyan 20 kis mennyiségben fordul elő, hogy a minta első közelítésben alkalmas a proteinek és a hisztamin illetve az ileum közötti kapcsolat vizsgálatára, — a Laurell-módszer érzékenysége lehetővé teszi, 25 hogy a termékben 0,182 Mg albumint mutassunk ki. „A" táblázat F 947 és F 950 jelű termékek elemanalízise C% H% N% éghetetlen maradék F947 43,91 6,39 9,05 0,9 43,72 6,32 8,91 0,7 F 950 41,83 6,20 6,09 3,1 41,66 6,04 8,06 3,7 „B" táblázat F 947 és F 950 jelű termékek cukor-részének analízise hexóz fukóz ozamin szialin (rezorcin) % % sav % % F 947 F 950 16,9 16 1,3 14,3 15 A termékek kémiai összetétele A fenti szennyeződések olyan kis mennyiségben 'vannak jelen, hogy nagyobb hiba nélkül megállapítható a protein kémiai összetétele. a) Szén-hidrogén-nitrogén elemanalízis 35 Az eredményeket az „A" táblázatban tüntettük fel. A táblázatból látható, hogy a két tanulmányozott frakció között csak minimális különbség van. 40 b) Proteinek A termékek protein-tartalma Gornal-féle biuret-eljárással meghatározva: 45 F 947; 56% F 950:: 42,8% A protein-tartalmat Lowry-féle módszerrel meg- 50 határozva, a következő eredményt kaptuk: F 9473 66,6% F 950: 46,7% 55 A Lowry-féle eljárásnál erősen zavar a termékek jelentős cukortartalma: ez nagy hibát visz a mérésbe. c) Cukrok 60 A glükoproteinek cukor-részét kolorimetriás eljárással (sósavas rezorcinnal) határoztuk meg. A kapott eredményeket a „B" táblázatban tüntettük fel. 65 30 D) Aminosavak A terméket 6N sósavval hidrolizáljuk, majd 24 órán keresztül 100 C°-on vákuumban tartjuk, végül ioncserélő gyantát tartalmazó kromatográfiai meghatározzuk az egyes aminosavak mennyiségét (erre a célra Technikon autoanalysert alkalmazunk). Az egyes termékek aminosav-összetételét a „C" táblázatban adjuk meg. „C" táblázat F 947 és F 950 jelű termék aminosav-összetétele (ju mól aminosav/mg minta) F 947 a-amino N : 6,5% F950 a-amino N : 7,4% Asp 0,350 0,236 Thr 0,238 0,108 Ser 0,114 0,135 Glu 0,427 0,261 Gly 0,114 0,122 Ala 0,145 0,153 Val 0,090 Ismeretlen 0,540 0,273 Cys 0,034 0,006 7