168735. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gamma-glutamil-p-nitroanilid-szárm előállítására és gamma-glutamiltranszpeptidaz aktivitásának meghatározására
3 168735 4 Különösen ez utóbbi meglepő, mivel a y-glutamil-p-nitroanilid (GLUPA) legtöbb, oldékonyságot javító szubsztituenst tartalmazó származéka a y-GT enzimhez szubsztrátként nem használható. Ezt mutatják a következő táblázatban összefoglalt kísérleti eredmények számos y-glutamil-p-nitroanilid-származék esetében. A táblázat azt mutatja, hogy kizárólag a találmány szerinti vegyületek azok, amelyek oldékonysága jobb és egyidejűleg y-GT enzimnek jó szubsztrátjai. Amennyiben a táblázatban a (III) általános képletű vegyületnél az X, A, B vagy C szubsztituensre külön jelentés nincs megadva, úgy az hidrogénatomot jelent. R jelentése a fenti. III. ált. képletű GLUPA*-hoz A vizsgált vegyület 1 Vékonyréteg-Elektroforetikus vegyület viszonyított átalakulás koncentrációja Oldékonyság Olvadáspont C° kromatográfia mozgékonyság 1. X=COONH4 115% 10 mmól > 300 mmól 185—187 0,94 0,81 2. X=S03 NH 4 160% 8 mmól > 300 mmól 186—187 0,79 0,82 3. X=COONH4 30—40% 4 mmól 1,65 0,725 C=CH3 20—30% 8 mmól 4. A=COONH4 0 8 mmól-ig > 120 mmól 176 szabad sav 1,5 szabad sav 0,72 szabad sav 5. A=S03 NH 4 0 8 mmól-ig > 120 mmól 6. A=OH 0 546 nm-nél < 4 mmól -= 4 mmól 217—219 1,75 0,68 7. A = CH3 kb. 45% 4 mmól < 60 mmól 180 1,68 0,265 8. X=CONH2 15% 8 mmól 8 mmól 216 1,27 0,26 9. X=C1 25% < 4 mmól =• 4 mmól 2,1 0,26 10. X=OH A kezdeti extinkció túl nagy, nem mérhető 185—187 1,9 0,69 ll.X=OCH3 15—25% 4 mmól 1,79 0,23 12. X = morfolino 10% 2 mmól nagyobb mennyiség a saját szín miatt nem lehetséges 1,51 0,179 13. A=C1 zavaros, nem kiértékelhető 4 mmól 4 mmól nem mérhető 1,57 0,25 14. X=C = = COONH4 22,3% 4 mmól 15. X=—O— —CH2 — 21,5% 4 mmól A irrró —COONH4 436 nm-nél 16. IV. ált. 3% kb. 1 mmól kb. 1 mmól 208 1,45 0,20 képletű 546 nm-nél vegyület 17. V. ált. képletű kb. 3% 4 mmól 4 mmól 1,48 0,22 vegyület 18. VI. ált. 20% 4 mmól < 4 mmól 178—180 1,48 0,23 képletű vegyület 1 * GLUPA = y-glutamil-p-nitro-anilid A táblázatban szereplő eredményeket a következő vizsgálatok alapján kaptuk: Meghatározott enzimaktivitású y-GT-t tartalmazó, tetszés szerinti humánszérum-mintánál, GLUPA-t alkalmazva szubsztrátként, mértük az átalakulási sebességet (hidrolízis-sebességet). Ezt 100%-nak véve, egyébként azonos kísérleti körülmények között mértük a felsorolt többi III általános képletű szubsztrátnál az átalakulási sebességet, amit a GLUPA-val kapott értékhez viszonyítottunk. A táblázat tartalmazza a vizsgált III általános képletű vegyületek (szubsztrátok) koncentrációját is az említett kísérletben. Az olvadáspontokat Kofler szerint határoztuk meg. A vékonyrétegkromatográfiát kovasav-gélen, n-buta-55 nol: jégecet: víz = 50: 15: 25 arányú elegyeben végeztük. A megadott értékek a glutaminsav = l-re (Rf = = 0,32—0,33) vonatkoznak. Az elektroforetikus mozgékonyságot 0,05 mólos, pH = 7,5-es trietilammóniumhidrogénkarbonát-puffer-60 ben határoztuk meg; az értékek a glutaminsav = l-re vonatkoznak. A találmány szerinti új vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy glutaminsav-anhidridet, amelynek aminocsoportján ftaloil-védőcsoport van, poláros oldószerben egy 65 VII általános képletű vegyülettel, ahol X karboxil- vagy 2
