168696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új noapeptidamid-származékok előállítására
11 168696 12 éterrel mossuk és a vizes réteget liofilizáljuk. A kapott port 0,19 térfogatrész H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hidrokloriddal és 0,0493 súlyrész HONBI-val együtt 5 térfogatrész DMF-ben oldjuk. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük és 0,0567 súlyrész DCC-t és 0,07 térfqgatrész N-etil-morfolint adunk hozzá. A rendszert egy éjszakán át keverjük. A DMF-et csökkentett nyomáson desztilláljuk és a maradékot vízben oldjuk. Az oldhatatlan részt kiszűrjük és a szűrletet átbocsátjuk Amberlite IRA-400 (acetát-ciklus) oszlopon. Az oszlopról távozó oldatot gyűjtjük és liofilizáljuk. A kapott terméket Amberlite XAD-2 oszlopra visszük, majd arról lineáris gradiensű víz-metil-alkohol rendszerrel leoldjuk. A főfrakciót Iiofilizálva 0,023 súlyrész H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHC2 H 4 OH-t kapunk. R f 3 =0,28; [a]fo = _ 54,4° (c =0,05, 5%-os ecetsavban). Aminosavelemzés: His 1,00 (1); Arg 1,05 (1); Ser 0,95 (1); Glu 1,00 (1); Pro 1,05 (1); Gly 1,00 (1); Leu 0,95 (l);Tyr 0,76(1). A zárójelben álló számok az elméleti értékeket jelölik. 3. példa H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHCH3 előállítása a) Z-Arg(N02 )-Pro-NHCH 3 készítése 5 térfogatrész DMF-ben feloldunk 0,675 súlyrész Z-Arg(N02 )-Pro-OH-t és 0,101 súlyrész metilamin-hidrokloridot, majd miközben az oldatot 0 °C-on hűtjük, cseppenként 0,21 térfogatrész trietilamint adagolunk. Az oldathoz ezután 0,322 súlyrész HONBI-t és 0,37 súlyrész DCC-t adunk és az egész keveréket 0 °C-on 5 órán át, majd szobahőmérsékleten 10 órán át keverjük. A melléktermékként keletkezett DC-karbamidot szűrjük és a DMF-et desztilláljuk. A maradékot kloroformmal kivonatoljuk, vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. A kloroformot elpároljuk, a maradékot etanollal kezeljük, majd metanol-éter oldószerelegyből újból kicsapjuk. A kitermelés 0,612 súlyrész (88%); Rf 1 =0,30; op.: 137—143 °C (boml.); [<x]£ = = — 41,5° (c = 1, metanolban). Elemzés a C20 H 2 9O 6 N 7 képlet alapján: számított: C = 51,82, H=6,31, N =21,15; • talált: C= 51,84, H=6,54, N= 21,57. b) Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHCH 3 készítése 5 súlyrész 25%-os HBr-ecetsavelegyben feloldunk 0,556 súlyrész Z-Arg(N02 )-Pro-NHCH 3 -at és az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten hagyjuk állni. Ekkor vízmentes étert adunk hozzá, a kivált kristályokat szűrjük és szárítjuk. Közben 0,312 súlyrész Z-Leu-OH-t oldunk 5 térfogatrész dioxán-etilacetát elegyben (1: 1), majd ehhez az oldathoz hűtés közben 0,268 súlyrész DCC-t és 0,232 súlyrész HONBI-t adunk. Az egész reakciókeveréket 2 órán át keverjük. A melléktermék DC-karbamidot szűréssel eltávolítjuk. A fenti módon kapott kristályos terméket hozzáadjuk a szűrlethez és 3 térfogatrész DMF hozzáadásával feloldjuk. Az oldathoz hűtés közben 0,17 térfogatrész trietilamint adunk és a rendszert egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert ezután elpároljuk, a maradékot kloroformmal kivonatoljuk és vízzel mossuk. A kloroformos réteget vízmentes magnéziumszulfáton víztelenítjük, majd elpároljuk a kloroformot. A maradékot éterrel felvesszük és metanol-éter elegyből újból kicsapjuk. A kitermelés 0,45 súlyrész (78%); Rf 1 =0,25. Elemzés a C26 H 40 O 7 N 8 képlet alapján: számított: C = 54,15, H = 7,02, N = 19,43; talált: C= 54,37, H=6,98, N = 19,52. c) 5 térfogatrész 25%-os HBr-ecetsavelegyben feloldunk 0,144 súlyrész Z-Leu-ArgíNO^-Pro-NHCBj-at, majd, miután az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten állni hagytuk, vízmentes étert adunk hozzá. A kivált csapadékot szűrjük és gondosan megszárítjuk. A megszárított anyagot 3 térfogatrész DMF-ben oldjuk, majd az oldathoz hűtés és keverés közben cseppenként 0,05 térfogatrész N-etil-morfolint adunk. Ebben az oldatban feloldunk 0,19 súly rész H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-GIy-OH-hidrokloridot, majd hozzáadunk 0,054 súlyrész HONBI-t és 0,062 súlyrész DCC-t. A reakciókeveréket 0 °C-on 2 órán át, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. A melléktermékként keletkezett DC-karbamidot szűréssel, a DMF-et pedig desztillálással eltávolítjuk. A maradékot Amberlite XAD-2 oszlopra visszük, majd arról 5%-os vizes etanol-vízmentes etanol lineáris gradiensű rendszerrel leoldjuk. A főfrakciót liofilizálva 0,137 súlyrész tiszta H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(N0 2)-Pro-NHCHj-at kapunk. E termékből 0,09 súlyrész mennyiségű hányadot 0 °C-on 1 órán át, 0,02 térfogatrész anizol és 0,02 térfogatrész merkapto-etanol jelenlétében 4 súlyrész hidrogénfluoriddal kezelünk. A hidrogénfluoridot ezután elpároljuk és a maradékot szárítás után vízben oldjuk. Az oldatot átbocsátjuk Amberlite IRA-400 (acetát-ciklus oszlopon, majd karboximetilcellulóz oszlopon adszorbeáljuk. Az anyagot az oszlopról 0,005 n vizes ammónium-acetát-0,2 n vizes ammóniumacetát lineáris gradiensű rendszerrel leoldjuk és a kívánt terméket tartalmazó főfrakciót liofilizáljuk. A művelet eredménye 0,06 súlyrész tiszta H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHCHj. Rf 3—0,37; [x]% = -55,6° (c=0,5, 5%-os vizes ecetsav oldatban). Aminosavelemzés: His 0,96 (1); Arg 0,98 (1); Ser 0,96 (1); Glu 1,00(1); Pro 1,00(1); Gly 1,00(1); Leu 0,98 (1); Tyr0,98(l);NH2CH 3 1,12(1). A zárójelben szereplő számok az elméleti értékeket jelentik. 4. példa H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-pirro-lidin előállítása a) IBOC-Pro-pirrolidin készítése 30 térfogatrész acetonitrilben feloldunk 11,7 súlyrész IBOC-Pro-OSU-t és 2,3 térfogatrész pirrolidint és az oldatot egy éjszakán át keverjük. Az acetonitrilt desztilláljuk és a maradékot etilacetáttal kivonatoljuk. A kivonatot vízzel mossuk, majd vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk. Az etilacetátot desztillációval eltávolítjuk és a kapott kristályokat etilacetát-petroléter oldószerelegyből átkristályosítjuk. A kitermelés 8,4 súlyrész (80,2%). Op. =84—84,5 °C; [a]g = - 83,4° (c = 1,0, metanolban). Elemzés a C20 H 32 O 3 N 2 képlet alapján: számított: C = 68,93, H = 9,26, N = 8,04; talált: C= 68,93, H=9,43, N=8,17. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
