168696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új noapeptidamid-származékok előállítására
9 168696 10 Z-Arg(NC>2)-Pro-OH-t és 0,181 súlyrész etil-amin-hidrokloridot, és az oldathoz, 0 °C-on, hűtés közben, cseppenként 0,38 térfogatrész trietil-amint adunk. Ezután 0,43 súlyrész HONBI-t és 0,495 súlyrész DCC-t adunk a keverékhez, amelyet 0 °C-on 5 órán át, majd szobahőmérsékleten 10 órán át keverünk. A melléktermékként keletkezett karbamidot kiszűrjük, és a DMF-ot kidesztilláljuk. A maradékot kloroformmal kivonatoljuk, vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. A kloroformot kiűzzük, a maradékot éterrel felvesszük, majd metil-alkohol-éter oldószerelegyből újból kicsapjuk. A kitermelés 0,692 súlyrész, Rf 1 = 0,50; op. 141—145 °C (boml.); [a]g = -44,6° (c = 1, metanolban). Elemzés a C2 iH 3 i0 6 N 7 képlet alapján: számított: C = 52,82, H = 6,54, N = 20,53; talált: C = 52,95, H=6,77, N = 19,65. b) Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC2 H 5 előállítása 5 térfogatrész 25%-os HBr-ecetsav elegyben feloldunk 0,572 súlyrész Z-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H r öt és az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakciókeverékhez ezután vízmentes étert adunk. A kivált csapadékot szűrjük és szárítjuk. Eközben 0,291 súlyrész Z-Leu-OH-t oldunk 5 térfogatrész dioxánban, majd az oldathoz hűtés közben 0,247 súlyrész DCC-t és 0,215 súlyrész HONBI-t adunk. A keveréket 2 órán át keverjük, majd szűréssel eltávolítjuk a melléktermékként keletkezett DC-karbamidot. A szűrlethez hozzáadjuk a fenti csapadékot, amelyet 3 térfogatrész DMF hozzáadásával feloldunk. A rendszerhez hűtés közben cseppenként 0,17 térfogatrész trietil-amint adunk, majd a keveréket szobahőmérsékleten egy éjszakán keresztül keverjük. Az oldószert ledesztilláljuk és a maradékot kloroformmal kivonatoljuk, és vízzel mossuk. A kloroformos réteget vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, majd a kloroformot elpároljuk. A maradékot éterrel felvesszük és metanol-éter oldószerelegyből ismételten kicsapjuk. A kitermelés 0,47 súlyrész (72%); op.: 144—146 °C (boml.); Rf 1=0,40; [a]£=-58,0° (c = 1, metanolban). c) 25%-os HBr-ecetsav elegyben oldunk 0,165 súlyrész Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC 2 H 5 -öt és az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután vízmentes étert adunk hozzá, és a kívánt csapadékot szűrjük, és gondosan megszárítjuk. Ezt a csapadékot 3 térfogatrész DMF-el felvesszük. Hűtés és keverés közben, cseppenként 0,05 térfogatrész N-etil-morfolint adunk hozzá. Ebben az oldatban feloldunk 0,19 térfogatrész H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hidrokloridot, majd az oldathoz 0,054 súlyrész HONBI-t és 0,062 súlyrész DCC-t adunk. A keveréket 0 °C-on 2 órán át, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán keresztül keverjük. A melléktermékként keletkezett karbamidot kiszűrjük és a DMF-et elpároljuk, a maradékot etilacetáttal kezelve 0,32 súlyrész súlyú port kapunk. Ezt a terméket Amberlite XAD-2 oszlopra visszük és 5%-os vizes etanol-vízmentes etanol lineáris gradiens rendszerrel eluáljuk. A kívánt terméket tartalmazó főfrakciót liofilizálva 0,11 térfogatrész tiszta H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(N02)-Pro-NHC2H 5 -öt kapunk. E terméket 0,02 térfogatrész anizol és 0,02 térfogatrész etántiol jelenlétében, 0 °C-on 1 órán át kezeljük 4 térfogatrész hidrogén-fluoriddal. A hidrogénfluoridot elpároljuk, és a maradékot szárítás után vízben oldjuk. Az oldatot átbocsátjuk Amberlite IRA-400 oszlopon (acetát-alak), majd karboximetilcellulóz oszlopon adszorbeáljuk. Az oszlopot 0,005 n vizes ammóniumacetát-0,2N vizes ammónium-acetát lineáris grádiensű rendszerrel eluáljuk és a kívánt terméket tartalmazó főfrakciót liofilizáljuk. 0,087 súlyrész tiszta 5 H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHC 2H terméket kapunk. Rf 3 = 0,36; [«]£ = - 56,2° (c = 0,05, 5%-os ecetsavban). Aminosavelemzés: His 0,95 (1); Arg 0,98 (1); Ser 0,95 (1); Glu 0,98 (1); Pro 1,00 (1); Gly 1,00 (1); Leu 10 1,00(1); Tyr 1,00(1); NH2 C,H 5 1,10(1). A zárójelben megadott számok az elméleti értékeket jelölik. 15 2. példa H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHC2H 4 OH előállítása a) Z-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH készítése 20 5 térfogatrész DMF-ben feloldunk 0,9 súlyrész Z-Arg(N02>Pro-OH-t és 0,43 súlyrész HONBI-t, majd az oldathoz, 0 °C-on végrehajtott hűtés közben, hozzáadunk 0,495 súlyrész DCC-t. A reakciókeveréket egy éjszakán át keverjük. A kivált karbamid vegyületet 25 szűréssel eltávolítjuk. A szűrlethez 0,1832 súlyrész etanolamint adunk és a rendszert egy éjszakán át keverjük. A DMF-et csökkentett nyomáson elpároljuk és a maradékhoz dioxánt adunk. Az oldhatatlan részt szűréssel eltávolítjuk. A dioxánt csökkentett nyomáson el-30 pároljuk és a maradékot n-butanollal kivonatoljuk. A kivonatot vízzel, 1 n vizes nátriumhidrogénkarbonát oldattal, majd vízzel az említett sorrendben mossuk és a n-butanolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot éterrel kezeljük és metanol-éter oldószerelegyből 35 újra kicsapjuk. A kitermelés 0,625 súlyrész (63,3%); op. 124—128 °C; Rf 2=0,23; [<xfe° = -36,6° (c =0,5, etanolban). b) Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH készítése 2 térfogatrész 25%-os HBr-ecetsavelegyben 0,493 40 súlyrész Z-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH-t oldunk és az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten hagyjuk állni. Ezután vízmentes étert adunk hozzá, a kivált csapadékot szűrjük és szárítjuk. Por alakú terméket kapunk. Közben 0,282 súlyrész Z-Leu-OH-t és 0,215 súlyrész HONBI-t 45 feloldunk 3 térfogatrész DMF-ben, az oldathoz 0 °C-on végrehajtott hűtés közben 0,248 súlyrész DCC-t adunk, majd a rendszert 2 órán át keverjük. Ehhez az oldathoz hozzáadjuk a fenti módon készített por alakú terméket és a keverékhez cseppenként 0,15 térfogatrész trietilamint 50 adunk. A reakciókeveréket egy éjszakán át keverjük. A kivált DC-karbamidot szűréssel eltávolítjuk és a DMF-et csökkentett nyomáson elpároljuk. A maradékot 50 súlyrész szilikagélből készült oszlopon adszorbeáljuk, majd arról 9 : 1: 0,5 arányú kloroform-metil-alkohol-55 -ecetsav oldószereleggyel leoldjuk. Az oldószereket desztillációval eltávolítjuk és a maradékot éterből kristályosítjuk. Akitermelés 0,153 súlyrész; op.: 110—113 °C (boml.); Rf 1=0,49; [«&"= -46,6° (c=0,5 etanolban). 60 c) 0,1 térfogatrész anizol jelenlétében 0,152 súlyrész Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH-t oldunk 3 térfogatrész hidrogénfluoridban. Az oldatot 0 °C-on 1 órán át keverjük. A hidrogénfluoridot kidesztilláljuk, a maradékot gondosan szárítjuk, majd vízben oldjuk. Kis meny-65 nyiségű tömény sósavoldat hozzáadása után az oldatot 5
