168696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új noapeptidamid-származékok előállítására
7 168696 8 Ha az A és/vagy B reagenst védőcsoporttal vagy -csoportokkal védtük, a kondenzációs termék molekulája rendesen tartalmazza a védőcsoportot vagy -csoportokat. Ilyen esetben, amint azt már említettük, a védőcsoportot vagy -csoportokat olyan szokványos módszerrel távolítjuk el, amely a nonapeptidamid-származék aminosav szekvenciáját nem zavarja meg. Ilyen módszer alkalmazása esetén védőcsoporttól vagy -csoportoktól mentes, I általános képletű nonapeptidamid-származékot kapunk. Ilyen szokványos eljárás például a védett termék katalitikus redukciója palládiumszén, szénre felvitt palládium vagy platina katalizátor jelenlétében; a savas hidrolízis, például hidrogén-fluoriddal vagy trifluorecetsavval vagy a kémiai redukció például fémnátriummal cseppfolyós ammóniás közegben. A kívánt terméket a műveletek bármelyike után önmagukban ismert, szokványos módszerekkel különíthetjük el. Ezek közé tartozik a fent már ismertetett kicsapás is. Az ily módon elkülönített végterméket alkalmas módszerrel, így például karboximetilcellulózon vagy tisztítási célokra a kereskedelmi forgalomban kapható polimer terméken, például Sephadex vagy Amberlite XAD—2 típusú gyantán végrehajtott oszlopkromatografiával tisztíthatjuk. Az alkalmazott reakciókörülményektől függően, a fenti kívánt terméket bázis vagy gyógyászatilag elfogadható savaddíciós só alakjában kapjuk. A sóból a bázist szokványos műveletekkel állíthatjuk elő, míg a bázist a megfelelő savval reagáltatva kaphatjuk meg a gyógyászatilag alkalmas sót. A számos ilyen sav között megemlíthetjük a szervetlen savak közül a sósavat, a hidrogén-bromidot, perklórsavat stb., a salétromsavat, tiociánsavat, kénsavat, foszforsavat stb., valamint számos szerves savat, így a hangyasavat, ecetsavat, propionsavat, glikolsavat, tejsavat, piroszőlősavat, oxálsavat, maionsavat, borostyánkősavat, maleinsavat, fumársavat, antranilsavat, fahéjsavat, naftalinszulfonsavat, szulfonilsavat stb. A fenti módon kapott végterméket önmagukban ismert, szokványos módszerekkel alakíthatjuk át komplex fémsókká. így például a leírt úton kapott nonapeptidamid-származék vizes oldatát cink, nikkel, réz vagy más sójával, hidroxidjával vagy oxidjával reagáltathatjuk, majd a reakciókeverék pH-ját 6—8-ra állítva be, a hordozó fémvegyület és az adott nonapeptidamid-származék csekély mértékben oldható adszorpciós komplex vegyülete keletkezik. Megállapítottuk, hogy az ilyen módon előállítható különböző komplex fémsók közül a gyógyászati alkalmazás során észlelt tartós aktivitása miatt a komplex cinksó vegyületek a legelőnyösebbek. Rendkívül kis toxicitása folytán a találmány szerinti eljárással előállított nonapeptidamid-származék vagy annak gyógyászatilag elfogadható sója biztonságosan adagolható, ugyanakkor a vegyület peteérést kiváltó hatása erős. Az I általános képletű nonapeptidamid-származékot vagy gyógyászatilag elfogadható sóját intravénásán, intramuszkulárisan vagy szubkután (a továbbiakban i. v., i. m., ill. s. c.) a patkánynak adva igen kis (pl. 50—500 ng/100 g) mennyiségben, a vérben a sárgatestképző hormon és a tüsző működését serkentő hormon koncentrációjának nagyfokú emelkedését figyeltük meg; i. v. vagy i. m. infúzióban adva a vegyületet patkánynak, 10—200 ng/100 g testsúly adag a kísérleti állatok kb. 50%-ánáI váltott ki peteérést, míg ugyanezen a módon végezve az adagolást, 0,1—5 [i.g/100 g adag 100%-ban váltott ki peteérést, még diösztruszban 5 (dioestrusban) adott patkányoknál is. Azonos adagban adva, az i. v. infúzió általában kétszer olyan hatásos, mint a s. c. infúzió. (Az „ng" jelölés mindenütt „nanogramot" jelent.) Az említett tények azt mutatják, hogy a találmány 10 szerinti eljárással előállított peptidek hormonaktivitása erősebb a természetben előforduló sárgatestképző hormont felszabadító hormonénál. Injekciós oldat készítéséhez a találmány szerinti vegyületeket fiziológiás sóoldatban oldjuk. 15 Tekintettel arra, hogy e vegyületek fiziológiai aktivitása igen kis mennyiségek esetén is kielégítő, előnyösen alkalmazhatók vivőanyagként (excipiensként) mannitot tartalmazó liofilizált ampullás készítmények alakjában. A következőkben ismertetett példák még részleteseb-20 ben szemléltetik a találmány szerinti eljárást. E példákban az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk: Z-: benziloxi-karbonil-csoport; IBOC-: izoborniloxi-karbonil-csoport; BOC-: terc-butiloxi-karbonil-csoport; 25 -OSU: N-hidroxi-szukcinimidészter-csoport; -OtBu: terc-butil-észter-csoport; -ONDP: 2,4-dinitrofenil-észter-csoport; -ONBI: N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid-észter-csoport; 30 HONBI: N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid; DCC: N,N'-diciklohexil-karbodiimid; DMF: N,N-dimetilformamid; TLC: vékonyrétegkromatográfia; DCHA: diciklohexilamin; 35 DC-karbamid- diciklohexil-karbamid. A vékonyrétegkromatográfiában a következő eluáló oldószerrendszereket használjuk: Rf 1 = kloroform-metil-alkohol-ecetsav (9:1: 0,5) Rf 2 = etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60: 20: 6 : 11) 40 Rf 3 =n-butanol-etilacetát-epetsav-víz (1:1:1:1) Rf 4 = n-butanol-ecetsav-víz (4:1:1) Rf 5 = n-butanol-piridin-ecetsav-víz (30: 20: 6 : 24) A példákban a „súlyrész" ugyanúgy viszonylik a „térfogatrész"-hez, mint a „gram" a „milliliter"-hez. 45 A „%" — ellenkező megjelölés nélkül — súlyszázalékot jelöl. Az „Amberlite GG-400 (a Lohm and Haas Co., USA forgalomba hozott terc-amin-sztirol-divinil-benzol kopolimer)"-t, a „Sephadex LH-20 (a Pharmacia Fine 50 Chemicals, Svédország által forgalomba hozott észterezett dextrán gél)"-t, az „Amberlite XAD-2 (a Lohm and Haas Co., USA által forgalomba hozott makroretikuláris sztirol-divinil-benzol kopolimer)"-t és az „Amberlite IRA-400 (a Lohm and Haas Co., USA által forgalomba 55 hozott terc-amin-sztirol-divinil-benzol kopolimer)"-t egyszerűen „Amberlite CG-400", „Sephadex LH-20", „Amberlite XAD-2", illetve „Amberlite IRA-400" rövidítésekkel jelöljük. 60 1. példa H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHC2H 5 előállítása a) Z-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 5 előállítása 65 10 térfogatrész DMF-ben feloldunk 0,901 súlyrész 4
