168696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új noapeptidamid-származékok előállítására
27 168696 28 főfrakciókat (150—210 ml) liofilizálva a tiszta terméket kapjuk; kitermelés 0,051 súlyrész; Rf 3 =0,47; [<%]& = — - 58,8° (c = 0,5,5%-os ecetsavban). Aminosavelemzés: His 0,81 (1); Arg 0,97 (1); Ser 0,93 (1); Glu 1,00 (1); Pro 0,97 (1); Gly 1,03 (1); Leu 1,05 (1); Tyr 1,03 (1); Trp 0,98 (1); NH2(CH 2 ) 2 CH 3 0,97 (1). A zárójelben megadott számok az elméleti értékeket jelölik. 15. példa H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHCH(CH3) 2 előállítása a) Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHCH(CH3 ) 2 készítése 1,12 súlyrész Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-OH és 0,43 súlyrész HONBI10 térfogatrész DMF-el készített oldatához 0 °C hőmérsékleten 0,49 súlyrész DCC-t adunk. Az elegyet 3 órán át 0 °C hőmérsékleten keverjük, majd a keletkezett DC-karbamidot kiszűrjük és a szűrlethez 0,12 súlyrész izopropilamint adunk. Az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert lepároljuk és a maradékot kloroformban oldjuk, majd vízzel mossuk. A kloroformos fázist vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk és a kloroformot lepároljuk. A maradékot éterrel kezeljük és metanol-éter elegyből átcsapjuk. Kitermelés 0,98 súlyrész termék; Rf 1 =0,59; op.: 114— 116°C;[aß2 = -48,2°(c= 1,0, etanolban). Elemzés a C28 H 44 0 7 N 8 képlet alapján: számított: C =55,61, H=7,33, N = 18,53; talált: C =55,88, H=7,12, N = 18,26. b) H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-GIy-Leu-Arg-Pro-NHCH(CH3) 2 készítése 2 térfogatrész 25%-os HBr-ecetsav elegyben 0,157 súlyrész Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-NHCH(CH 3 ) 2 -t oldunk és az oldatot 40 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyhez vízmentes étert adunk és a kivált csapadékot leszűrjük, majd szárítjuk. A csapadékot ezután 2 térfogatrész DMF-ben oldjuk és hűtés közben 0,09 térfogatrész N-etil-morfolint adunk hozzá. A kapott oldatban 0,19 súlyrész H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hidrokloridot, 0,09 súlyrész HONBI-t és 0,103 súlyrész DCC-t oldunk. Az elegyet 2 órán át 0 °C hőmérsékleten, további 16 órán keresztül pedig szobahőmérsékleten keverjük. A keletkezett DC-karbamidot kiszűrjük és a DMF-et lepároljuk. A maradékot éterrel trituráljuk és így 0,32 súlyrész port kapunk. Ezt Amber -lite XAD-2 oszlopra visszük fel és 5%-os vizes etanolvízmentes etanol lineáris gradiensű rendszerrel eluáljuk. A főfrakciókat (46—67% etanol tartalom) bepároljuk, majd liofilizálva 0,095 súlyrész védett nonapeptidamidot kapunk. Ezt 4 térfogatrész hidrogénfluoridban oldjuk, 0,02 térfogatrész anizol és 0,02 térfogatrész 2-merkapto-etanol jelenlétében. Az elegyet — 5 °C hőmérsékleten 1 órán át keverjük, majd a hidrogénfluoridot lepároljuk és a maradékot 10 térfogatrész vízben oldjuk. Az oldatot Amberlite IRA-400 (acetát ciklus) oszlopon engedjük keresztül és az eluátumot egy karboximetilcellulóz oszlopra visszük fel. Az oszlopot 0,005 n vizes ammóniumacetát-0,2n vizes ammóniumacetát lineáris gradiensű rendszerrel eluáljuk. A főfrakciókat, melyek a kívánt terméket tartalmazzák, egyesítjük és liofilizálva kapjuk a tiszta terméket. Kitermelés 0,055 súlyrész; Rf 3 = 0,41; [a]» _ _ 55; 4° ( C = o,5, 5%-os ecetsavban). Aminosavelemzés: His 0,97 (1); Arg 1,00(1); Ser 0,78 (1); Glu 1,00(1); Pro 0,97 (1); Gly 1,03 (1); Leu 1,00 (1); Tyr 0,97 (1); Trp 0,89 (1); NH2CH(CH 3 ) 2 1,01 (1). A zárójelben megadott számok az elméleti értékeket je-5 lölik. Szabadalmi igénypontok 10 1. Eljárás az I általános képletű, H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-ArGly-A 2 -Arg-Pro-Y (I) peteérést kiváltó hatású, új nonapeptidamid származékok, valamint gyógyászatilag elfogadható savaddíciós 15 sóik előállítására, amely általános képletben Aj jelentése L-tirozil- vagy L-fenilalanilcsoport, A2 L-leucil-, L-izoleucil-, L-norleucil-, L-valil-, L-norvalil-, L-metionil- vagy L-fenil-alanilcsoportot jelent, Y pedig NHR általános képletű csoportot képvisel, 20 amelyben az R 1—3 szénatomszámú, egyenes vagy elágazott szénláncú alkilcsoport, amely hidroxilcsoporttal helyettesített lehet vagy Y pirrolidincsoportot is jelenthet, azzal jellemezve, hogy valamely A reagenst, nevezetesen L-piroglutamin-25 savat vagy olyan peptidtöredéket, amely a terminális nitrogén oldalon L-piroglutaminsav egységet [H-(Pyr)Glu-csoportot] visel és amely innen kezdve a fenti aminosav sorrendet tartalmazza, az I általános képletű nonapeptidamid származék többi részének megfelelő 30 valamely amin-összetevővel — B reagenssel — kondenzálunk, ahol az A és B reagensek kívánt esetben a peptidszintézisnél szokásos védőcsoporttal vagy védőcsoportokkal védettek lehetnek, majd adott esetben a védőcsoportot vagy-csoportokat eltávolítjuk. (Elsőbbsége: 35 1973. IV. 28.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHC2H 5 előállítására azzal jellemezve, hogy Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 5 -öt és H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-40 -Tyr-Gly-OH-hidrokloridot kondenzálunk, majd a védőcsoportot lehasítjuk. (Elsőbbsége: 1972. IV. 29.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-GIy-Leu-Arg-Pro-NHC2H 4 OH előállítására azzal jellemezve, hogy H-45 -(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hidrokloridot és Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH-t kondenzálunk majd a védőcsoportot lehasítjuk. (Elsőbbsége: 1972. IV. 29.) 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-50 -NHCH3 előállítására azzal jellemezve, hogy H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hidrokloridot és Z-Leu-Arg(NOa )-Pro-NHCH 3 -at kondenzálunk, majd a védőcsoportot lehasítjuk. (Elsőbbsége: 1972. IV. 29.) 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 55 módja H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-Ile-Arg-Pro-NHC2 H 5 előállítására azzal jellemezve, hogy H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-GIy-OtBu-t és Z-Ile-ArgíNO^-Pro-NHC2 H 5 -öt kondenzálunk, majd a védőcsoportot lehasítjuk. (Elsőbbsége: 1972. XI. 24.) 60 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Tyr-Leu-Arg-Pro-pirrolidin előállítására, azzal jellemezve, hogy H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hidrokloridot és H-Leu-Arg-Pro-pirrolidint kondenzálunk. (Elsőbbsége: 1972. IV. 65 29.) 14
