168696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új noapeptidamid-származékok előállítására
23 168696 24 tisztítunk tovább. Az oszlopot 0,005 n vizes ammóniumacetát-0,2 n vizes ammóniumacetát puffer lineáris gradiensű rendszerrel eluáljuk és a kívánt terméket tartalmazó főfrakciókat Iiofilizálva a tiszta peptidet nyerjük. Kitermelés 0,16 súlyrész. [<X]D= —56,4° (c = 0,52, 5%-os vizes ecetsavban), Rf 3 = 0,34. Aminosavelemzés: His 0,98 (1); Arg 1,00 (1); Ser 0,94 (1); GIu 1,00 (1); Pro 1,00 (1); Gly 1,02 (1); Nva 0,98 (1); Tyr 0,97 (1); NH2C 2 H 5 1,12 (1). A zárójelben álló számok az elméleti értékeket jelölik. 11. példa H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Phe-Arg-Pro-NHC2H 4 OH előállítása a) Z-Phe-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH készítése 2 térfogatrész 25%-os HBr-ecetsav elegyben 0,50 súlyrész Z-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH-t oldunk és az oldatot 30 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Az elegyhez vízmentes étert adunk, és a kivált csapadékot leszűrjük, majd nátriumhidroxid felett csökkentett nyomáson szárítjuk. Ugyanakkor 0,31 súlyrész Z-Phe-OH-t és 0,216 súlyrész HONBI-t oldunk 3 térfogatrész DMF-ben. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük és az oldathoz 0,248 súlyrész DCC-t adunk. Az elegyet 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd hozzáadjuk az előzőekben előállított port, valamint 0,15 térfogatrész trietilamint. Az elegyet 24 órán át keverjük, a keletkezett DC-karbamidot szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet száraz magnéziumszulfát felett szárítjuk, majd bepároljuk. A maradékot éterrel triturálva fehér port kapunk, melyet leszűrünk és etanol-éter elegyből átcsapunk. Kitermelés 0,24 súlyrész termék, [a]" = —62,6° (c =0,5, metanolban), Rf 1 = 0,51. b) H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-GIy-Phe-Arg-Pro-NHC2H 4 OH készítése 10 térfogatrész ecetsavban 0,30 súlyrész Z-Phe-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH-t oldunk, hozzáadunk 0,30 súlyrész palládiumkorom katalizátort és az elegyet 8 órán át hidrogénezzük. A katalizátort ezután kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 10 térfogatrész vízben oldjuk, kis mennyiségű tömény sósavval együtt, és az oldatot liofilizáljuk. A keletkezett port és 0,40 súlyrész H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH-hidrokloridot 10 térfogatrész DMF-ben oldjuk. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük és 0,10 súlyrész HONBI-t, 0,14 térfogatrész N-etil-morfolint és 0,12 súlyrész DCC adunk hozzá. Az elegyet 48 órán át keverjük, majd a DMF-t csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot vízben oldjuk és a kis mennyiségű oldhatatlan anyagot kiszűrjük. A szűrletet Amberlite IRA-400 (acetátciklus) oszlopon engedjük keresztül. Az elfolyó oldatot liofilizáljuk, és karboximetilcellulózzal töltött oszlopon abszorbeáltatjuk, majd 0,005 n ammóniumacetát-0,2 n ammóniumacetát puffer lineáris gradiensű rendszerrel eluáljuk. A kívánt terméket tartalmazó főfrakciókat Iiofilizálva 0,12 súlyrész tiszta peptidet kapunk. [oeJn = —64,0° (c = 0,4, 5%-os ecetsavban), Rf 3 = 0,26. Aminosavelemzés: His 1,02 (1); Arg 1,00 (1); Ser 0,89 (1); Glu 1,01 (1); Pro 0,98 (1); Gly 1,00 (1); Phe 0,98 (1); Tyr 0,89 (1); NH2C 2 H 4 OH 1,06 (1). A zárójelben álló számok az elméleti értékeket jelölik. 12. példa H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-Phe-Arg-Pro-NHC2H 4 OH előállítása 5 10 térfogatrész ecetsavban 0,18 súlyrész Z-Phe-Arg(N02 )-Pro-NHC 2 H 4 OH-t oldunk, majd 0,20 súlyrész palládiumkorom katalizátort adunk hozzá és az elegyet 12 órán át hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 10 térfogat 10 vízben oldjuk, kis mennyiségű tömény sósav hozzáadásával, és az oldatot Iiofilizálva kapjuk az aminkomponenst. Ugyanakkor 0,22 súlyrész H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-OtBu-t oldunk 5 térfogatrész trifluorecetsavban és az oldatot szobahőmérsékleten 40 percen át állni 15 hagyjuk. Az oldathoz 0,05 térfogatrész 5,7 n sósavat adunk, majd 50 térfogatrész vízmentes étert, mikoris csapadék keletkezik. A csapadékot leszűrjük, szárítjuk és 3 térfogatrész DMF-ben oldjuk. Az oldathoz hozzáadjuk a fentiek szerint előállított aminkomponenst, 20 valamint 0,097 súlyrész HONBI-t és 0,126 térfogatrész trietilamint. Az elegyet 0 °C-ra hűtjük és 0,12 súlyrész DCC-t adunk hozzá. A keletkezett elegyet 0 °C hőmérsékleten 5 órán át keverjük, majd a keverést szobahőmérsékleten további 10 órán át folytatjuk. A reakció|25 elegyet szűrve eltávolítjuk a keletkezett DC-karbamidot és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot minimális mennyiségű 10%-os vizes etanolban oldjuk és az oldatot Amberlite XAD-2 oszlopra visszük fel. Az eluciót 10%-os vizes etanol- 80%-os vizes etanol 30 lineáris gradiensű rendszerrel végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat (a termék 25 és 36% etanolkoncentráció között eluálódik) egyesítjük, bepároljuk, majd Iiofilizálva 0,092 súlyrész fehér port kapunk. A port 2 térfogatrész 0,1 n vizes ecetsav oldatban oldjuk 35 és Sephadex LH-20 oszlopon vezetjük át. Az átfolyó oldatot Iiofilizálva 0,074 súlyrész tisztaterméket kapunk. MD = - 62 >°° (c = 0,4, 5%-os ecetsavban), R f 3 = 0,42. Aminosavelemzés: His 1,05; Arg 1,00; Trp 0,89; Ser 0,89; GIu 1,02; Pro 1,00; Gly 1,02; Phe 2,08; 40 NH2 C 2 H 4 OH 1,12. 13. példa 45 H-(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-Met-Arg-Pro-NHC2H 5 előállítása 0,20 súlyrész BOC-Met-ArgíNO^-Pro-NHCjHj-öt oldunk 0,1 térfogatrész 2-merkapto-etanoI és 5 térfogatrész trifluorecetsav elegyében, és az oldatot 30 percen át 50 szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután 0,08 térfogatrész 5,7 n sósavat majd 50 térfogatrész vízmentes jéghideg étert adunk hozzá. A keletkezett csapadékot leszűrjük, éterrel mossuk, és szárítás után az aminkomponenst kapjuk fehér porként. 55 Ugyanakkor 0,22 súlyrész H-(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-OtBu-t oldunk 5 térfogatrész trifluorecetsavban, az oldatot 40 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, ezután 0,05 térfogatrész 5,7 n sósavat, majd 50 térfogatrész étert adunk az oldathoz, majd a kelet-60 kezett csapadékot leszűrjük és szárítjuk. A szárított csapadékot 4 térfogatrész DMF-ben oldjuk, a fentiekben készített aminkomponenssel együtt. Ehhez az oldathoz 0,13 térfogatrész trietilamint adunk és az oldatot 0 °C-ra hűtjük. A hűtött oldathoz 0,10 súlyrész HONBI-t és 0,12 65 súlyrész DCC-t adagolunk. A reakcióelegyet 0 °C-ont 12
