168431. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására
168431 10 éterrel kicsapjuk, az étert cseréljük és a maradékot oldjuk 25 ml kloroformban. A fölös hidrogén-bromidot trietil-aminnal közömbösítjük, majd az oldat pH-ját 7,5-8,5 közé állítjuk. 3. ciklus A fenti kloroformos oldathoz 0,94 g (2 mmól) BOC-Trp-OPFP-t adunk és az oldatot ezen a pH-értéken tartva 20 percig keverjük. Ezután az oldószert etil-acetátra cseréljük, majd hozzáadunk 0,22 ml N,N-dimetilamino-etüamint. 5 perc múlva az oldatot kirázzuk 3X20 ml 10%-os citromsav- és 2X20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert ledesztilláljuk és a maradék védett tetrapeptidet száraz éterrel eldolgozva szűrjük, mossuk. Termelés: 0,75 g (75%), ami ciklusonként 91%-os termelésnek felel meg. Op.: 108-114 °C;RJÍ: 0,65 [a]ls = + 16,9° (c=l; dioxán). A szintézis időigénye 4 óra, ez ciklusonként átlag 80 percnek felel meg. Elemanalízis: elméleti: C 47,0%, H 3,1% N 11,9%; talált: C 47,4%, H 3,7%, N 12,2%. A BOC-csoport eltávolításával kapott N-terminálisán szabad tetrapeptid egységes, Rf: 0,5. 3. példa BOC-Ser(Ac)-Tyr(Ac)-Ser(Ac)-Met-OMe szintézise. 1. ciklus 1,2 g (6 mmól) H-Met-OMe-HCl-ot 25 ml etilacetátban szuszpendálunk, majd hozzáadunk 0,84 ml (6 mmól) trietil-amint és 1,24 g (3 mmól) BOC-Ser(Ac)-OPFP-t. 30 perces szobahőmérsékleten történő keverés után az etil-acetátos-oldatot kirázzuk 2X20 ml 10%-os citromsavoldattal, majd 1X20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett dipeptidet (Rf: 0,65) leöntjük 10 ml hidrogén-bromiddal telített kloroformmal. 5 perces rázogatás után a szabad dipeptidhidrobromidot (Rf 0,25) száraz éterrel kicsapjuk, az étert cseréljük, majd dekantáljuk. A maradékot oldjuk 20 ml kloroformban, a fölös hidrogén-bormidot dimetilsárga jelenlétében trietil-aminnal közömbösítjük. 2. ciklus A fenti kloroformos oldathoz 2,94 g (6 mmól) BOC-Tyr(Ac)-OPFP-t és 0,42 ml (3 mmól) trietilamint adunk és 15 percig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert 30 ml etil-acetátra cseréljük, hozzáadunk 0,65 ml (6 mmól) N,N-dimetilamino-etilamint majd 5 perc múlva az etil-acetátos-oldatot kirázzuk 2X20 ml 10%-os citromsavoldattal és 1X20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett tripeptidet (Rf: 0,58) 10 ml hidrogén-bromiddal telített kloroformmal öntjük le. 5 perc után a tripeptid-hidrobromidot száraz éterrel kicsapjuk, az étert cseréljük, majd dekantáljuk. A maradék tripeptid-hidrobromidot (Rf: 0,47) 20 ml kloroformban oldjuk és a fölös hidrogén-bromidot dimetilsárga jelenlétében trietil-aminnal közömbösítjük. 3. ciklus A fenti kloroformos oldathoz 2,48 (6 mmól) BOC-Ser-(Ac)-OPFP-t és 0,42 ml (3 mmól) trietilamint adva, az oldatot 15 percig 7,5—8,5 pH-érték 5 tartása mellett szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert 40 ml etil-acetátra cseréljük, hozzáadunk 0,65 ml (6 mmól) NJí-dimetilamino-etilamint, majd 5 perc múlva az oldatot kirázzuk 2X20 ml 10%-os citromsav- és 2X20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbo-10 nát-oldattal. Szárítás után az oldószert ledesztilláljuk és a szilárd maradékot éterrel eldörzsölve szűrjük. Termelés: 1,13 g (52%), ami ciklusonként 80,4%-os termelésnek felel meg: Op.: 155—161 °C, az analitikai célokra átkristályosí-15 tott terméké: 168-170 °C. Rj: 0,57. Analízis a C32 H^ Oa N 4 S (M: 726,81) képlet alapján: elméleti: C 52,9%, H 6,4%, S 4,4%; 20 talált: C 52,9%, H 6,3%, S 4,7%. A szintézis időigénye 4 óra, ciklusonként átlag 80 perc. A nyerstermék metanolos oldatához hidrazin-25 hidrátot adva 90%-os termeléssel nyerhető további .kapcsolásra alkalmas BOC—Ser—Tyr—Ser-Met— NHNH2 . Op.: 186-187 °C; [oT£s -= -33,8° (c=l,014, metanol-víz = 1:1) 30 4. példa BOC-Arg(N02 )-Ly<Tos)-Pro-OMe szintézise. 1. ciklus 1,02 g (6,0 mmól) H-Pro-OMe-HCl-ot 15 ml 35 kloroformban oldunk, hozzáadunk 0,84 ml (6,0 mmól) trietil-amint, majd 1,33 g BOC-Lys(Tos)— OPFT-t és az oldatot 15 percig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldatot kirázzuk 3X15 ml 10%-os citromsav-, majd 3X15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-40 karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett dipeptidet (Rf: 0,7) leöntjük 5 ml hidrogén-bromiddal telített kloroformmal. 5 perc múlva a dipeptidhidrobromidot száraz éterrel kicsapjuk, az étert 45 cseréljük, majd dekantáljuk. A maradék dipeptidhidrobromidot (Rf: 0,45) 20 ml dioxánban oldjuk és a fölös hidrogén-bromidot dimetilsárga jelenlétében trietil-aminnal közömbösítjük. 2. ciklus 50 A fenti dioxános oldathoz hozzáadunk 1,94 g (4 mmól) BOC-Arg(N02 )-OPFT-tés 0,28 ml (2 mmól) trietil-amint. 20 perc keverés után az_oldószert 30 ml etil-acetátra cseréljük, hozzáadunk 0,44 ml (4 mmól) N^-drmetilamino-etilamint és 5 perc múlva az olda-55 tot kirázzuk 3X20 ml 10%-os citromsav- majd 3X20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékot száraz éterrel eldörzsölve szűrjük. A nyersterméket kétszer etilacetát-diizopropiléterből 60 tisztítva 1,12 g (75,7%), terméket kapunk. Ez ciklusonként 87%-os termelésnek felel meg. Op.: 90-92 0 C.Rj: 0,50. [aßs= -35,8° (c= 1; etanol). Analízis a C30H48N 8 OioS (M = 712,83) képlet 65 alapján:
