168431. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására

168431 7 8 közömbösítjük, majd az oldat pH-ját 7,5-8,5 közé állítjuk. 3. ciklus Az így előkészített kloroformos oldathoz 2,3 g (6 mmól) BOC-Val-OPFP-t adunk és 30 percig szobahőmérsékleten keverjük úgy, hogy az oldat pH-ját trietil-amin segítségével az eredeti értéken tartjuk. Ezután hozzáadunk 8 ml mólos N,N-dimetilaminoetilamin kloroformos oldatát, majd 10 perc után az oldatot kirázzuk 3X15 ml 10%-os citromsav- és 2X15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett pentapeptidet (Rf: 0,65) 4 ml hidrogén-bromiddal telített dioxánnal öntjük le. 5 perc után a pentapeptid-hidro-bromidot száraz éterrel kicsapjuk, az étert cseréljük, majd dekantáljuk. A szilárd maradékot (R?: 0,3) oldjuk 15 ml kloroformban, a fölös hidrogén-bromidot közömbösítjük, majd az oldat pH-ját trietil-amin segítségével 7,5-8,5 közé állítjuk. 4. ciklus A kloroformos oldalhoz 1,72 g (2 mmól) BOC-Phe-OPFP-t adunk és az eredeti pH-érték tartása mellett 20 percig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután hozzáadunk 4 ml mólos kloroformos N,N-dimetilamino-etilamin-oldatot és 5 perc után az oldatot kirázzuk 3X15 ml 10%-os citromsav-, majd 2X15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett hexapeptidet (Rf: 0,7) 6 ml hidrogén-bromiddal telített dioxánnal öntjük le. 5 perc után a hexapeptid-hidrogénbromidot száraz éterrel kicsapjuk, az étert cseréljük, majd dekantáljuk. A szilárd maradékot (Rf: 0,45) 15 ml kloroformban oldjuk, majd a fölös hidrogénbromid közömbösítése után az oldat pH-ját trietilaminnal 7,5—8,5 közé állítjuk. 5. ciklus A fenti kloroformos oldathoz 2,58 g (6 mmól) BOC-Phe-OPFP-t adunk és az eredeti pH-érték tartása mellett 20 percig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután hozzáadunk 8 ml mólos kloroformos N,N-dimetilamino-etilamin-oldatot, majd 5 perc múlva az oldatot kirázzuk 3X15 ml 10%-os citromsav-, majd 2X15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátoldattal. Szárítás után a kloroformot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett heptapeptidet (R|: 0,8) 6 ml kloroformmal és 6 ml hidrogén-bromiddal telített dioxánnal öntjük le. 5 perc múlva a heptapeptid-hidrobromidot száraz éterrel kicsapjuk (Rf :0,6) az étert cseréljük, majd dekantáljuk a szilárd maradékról, amelyet 15 ml kloroformban oldunk. A fölös hidrogén-bromidot dimetilsárga jelenlétében közömbösítjük, majd az oldat pH-ját 7,5-8,5 közé állítjuk trietil-amin segítségével. 6. ciklus Az így előkészített oldathoz 2,88 g (6 mmól) BOC-Pro-Pro-OPFP-t adunk és az oldatot az eredeti pH-érték tartása mellett 20 percig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert cseréljük etil-acetátra és hozzáadunk 0,88 ml (8 mmól) N,N-dimetilamino-etilamint. 5 perc leteltével az oldatot kirázzuk 3X15 ml 10%-os citromsav- majd 2X15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Az etil-acetátot csökkentett' nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett nonapeptidet (Rf ^0,6) leöntjük 6 ml hidrogén-bromiddal telített dioxánnal. 5 perc állás után a nonapeptid-hidro-bromidot (Rjl:

0>5) száraz éterrel 5 kicsapjuk, az étert cseréljük, majd dekantáljuk. A szilárd anyagot oldjuk 15 ml kloroformban, a fölös hidrogén-bromidot dimetilsárga jelenlétében közömbösítjük, majd az oldat pH-ját 7,5-8,5 közé állítjuk. 10 7. ciklus A fenti kloroformos oldathoz 2,58 g (6 mmól) BOC-Phe-OPFP-t adunk és a pH-érték tartása mellett 20 percig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert cseréljük etil-acetátra és hozzáadunk 0,88 15 ml (8 mmól) N,N-dimetüamino-etilamint. 5 perc múlva az oldószert etil-acetátra cseréljük és kirázzuk 3X15 ml 10%-os citromsav-, majd 2X15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a 20 maradék védett dekapeptidet száraz éterrel eldolgozva szűrjük, mossuk. Termelés: 1,31 g (50%), ami ciklusonként 89%-os termelésnek felel meg. Rf : 0,6. Aminosav-analízis: Pro: 4,2(4,0); Val: 1,0(1,0); Ala: 1,0(1(1,0);Phe: 3,8(4,0). 25 A szintézis időigénye 8,5 óra, ciklusonként átlag 73 perc. A védett dekapeptid-metilésztert 1 n nátrium-hidroxid-oldattal dioxánban elszappanosítva egységes C-terminálisán szabad dekapeptid kapható. R|: 0,25. 30 2. példa BOC-Trp-Glu(ONB)-His(NDP)-Phe-OMe szintézise. 1. ciklus 0,22 g (1 mmól) Híhe-OMe-HCl-ot oldunk 10 ml 35 kloroformban, hozzáadunk 0,28 ml (2 mMól) trietilamint és 1,17 g (2 mmól) BOC-His(NDP)-OPFP-t. 30 perces szobahőmérsékleten történő keverés után az oldathoz adunk 0,22 ml N,N-dimetüamino-etilamint, majd 5 perc múlva az oldatot kirázzuk 3X15 ml 40 10%-os citromsav- és 1X15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett dipeptidet (Rj: 0,6) leöntjük 2 ml 7 n dioxános hidrogén-bromid-oldattal. 10 perc múlva a 45 dipeptid-hidro-bromidot (R|: 0,55) száraz éterrel kicsapjuk, az étert cseréljük, majd dekantáljuk. A maradékot oldjuk 30 ml kloroformban, a fölös hidrogén-bromidot dimetilsárga jelenlétében trietilaminnal közömbösítjük, majd az oldat pH-ját 7,5-8,5 50 közé állítjuk. 2. ciklus A fent előkészített oldathoz 1,1 g (2 mmól) 55 BOC-Glu(ONB)-OPFP-t adunk és 20-percig az eredeti pH-érték tartása mellett szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert etil-acetátra cseréljük, hozzáadunk 0,22 ml (2 mmól) N,N-dimetÜamino-etilamint, majd 5 perc múlva az oldatot kirázzuk 4X20 ml 60 10%-os citromsav- és 2X20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal. Szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradék védett tripeptidet (Rf

: 0,7) leöntjük

1 ml kloroformmal és 2 ml 7 n dioxános hidrogén-bromiddal. 10 perc 65 után a tripeptid-hidro-bromidot (Rf: 0,7) száraz A