168352. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,5-bisz(szubsztituált amino)- 1,3,4-tiadiazolok előállítására
3 168352 4 KB vagy L-132 sejtvonalból műanyag sejttenyésztő edényekben egybefüggő egyrétegeket alakítunk ki, és a rétegeket légzőszervi megbetegedéseket okozó vírusokkal (például az egyszerű meghűlés kórokozójával) fertőzzük meg. E vírusok közé tartoznak a picornaví- 5 rus-csoport tagjai, így a rhinovírusok, például az IB, 2, 5, 14 vagy 23 típusú rhinovírusok, továbbá az enterovírusok, így a Coxsackie A-15 és A-21 vírus. A hatóanyagoknak a vírusok sejtkárosító hatása ellen biztosított védelmét gátlási kísérletekben vizsgáljuk; e 10 kísérletek során a hatóanyagot szűrőpapíron adszorbeáltatjuk, és a szűrőpapírt a megfertőzött egyréteges sejttenyészetet fedő agar-rétegre helyezzük, vagy beágyazzuk az agar-rétegbe. Az egyréteges sejttenyészet fedésére Earle-féle sókoncentrátumot (Grand Island 15 Biological Company, Grand Island, New York) tartalmazó Eagle-féle minimális alap-táptalajt használunk fel, amelyhez 0,4% ionagar No. 2-t, 0,01%dietil-aminoetil-dextránt, 0,06% magnézium-kloridot és 2 térfogat% borjú-magzatszérumot adunk. 20 A vírussal megfertőzött egyréteges sejttenyészetet a vizsgálandó vegyülettel együtt 5% szén-dioxidot tartalmazó, nedves atmoszférában 3—5 napon át a vírus jellegétől függően 33 C°-on vagy 37 C°-on inkubáljuk. Ezután a sejttenyészetet 0,5% kristály- 25 ibolyát tartalmazó 20%-os vizes etanollal festjük meg. A színezék csak a védett (megfertőzetlen) sejteket festi meg, így a védett sejtek aránya könnyen meghatározható. A kísérlet eredményeit az 1. táblázatban közöljük. 30 1. táblázat Rhinovirus Hatóanyag 2 5 14 23 IB 35 2,5-bisz(ciklohexilamino)-l,3,4-tiadiazol + + + + + 2,5-bisz(ciklopentil- 40 amino)-l,3,4-tiadiazol + + + 2,5-bisz(4-metil-piperazm-l-ü)-l,3,4-tiadiazol + + + = a hatóanyag védi a szöveteket a vírus roncsoló hatásával szemben A 2,5-bisz(ciklohexil-amino)-l,3,4-tiadiazol a Coxsackie A—15, Coxsackie A—21 és a poliomyelitis vírussal szemben is védőhatást biztosít. 50 A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa 55 2-Amino-5-bróm-l,3,4-tiadiazol előállítása 50 g (0,5 mól) 2-amino-l,3,4-tiadiazolt szobahőmérsékleten 250 ml ecetsavban oldunk, és az oldathoz egy részletben 25 ml (0,5 mól) brómot adunk. Az elegy 55 C°-ra melegedik. Az exoterm reakció lezaj- 60 lása után az oldatot 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 40 g nátrium-acetát 400 ml vízzel készített oldatával hígítjuk. A termék igen gyorsan . kikristályosodik. Az elegyet éjszakán át hűtjük, majd"-' a kivált terméket elkülönítjük, vízzel mossuk és 65 szárítjuk. 80 g 2-amino-5-bróm-l,3,4-tiadiazolt kapunk; op.: 176 °C. 2. példa 2,5-Dibróm-l,3,4-tiadiazol előállítása 27 g (0,15 mól) 2-amino-5-bróm-l,3,4-tiadiazol 200 ml 85%-os foszforsawal készített oldatához 5 C°-on 40 ml tömény salétromsavat adunk. Az elegyet 0 C°-ra hűtjük, és az elegybe —5 °C és 0 °C közötti hőmérsékleten, keverés közben 11,4 g (0,165 mól) nátrium -nitrit 20 ml vízzel készített oldatát csepegtetjük. Az elegyet további 15 percig keverjük, majd lassú ütemben, erélyes keverés közben 28 g réz-szulfát és 78 g nátrium-bromid 200 ml vízzel készített, 0-5 C°-os oldatához adjuk. A jégfürdőt eltávolítjuk, és az elegyet 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyet körülbelül 1600 ml vízbe öntjük. A kapott elegyet éjszakán át hűtjük, a kivált terméket elkülönítjük, és levegőn szárítjuk. A kapott nyersterméket 125 ml kloroformmal elegyítjük, aktív szénnel derítjük, szűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 21,5 g sárga, kristályos 2,5-dibróm-1,3,4-tiadiazolt kapunk; op.: 111-112 °C. 3. példa 2,5-Bisz (ciklohexil-amino)-lr 3,4-tiadiazol előállítása 29,2 g (0,12 mól)2,5-dibróm-l,3,4-tiadiazolés62 ml (53,5 g, 0,532 mól) ciklohexil-amin 360 ml etanollal készített oldatát 3,75 órán át visszafolyatás közben forraljuk.'Az oldatot aktív szénnel derítjük, és szűrjük. A szűrletet lassú ütemben, hűtés közben vízzel 680 ml végtérfogatra hígítjuk. A kapott elegyet éjszakán át hűtjük, és a kivált 21,0 g kristályos nyersterméket elkülönítjük. A nyersterméket 150 ml forró etanolban oldjuk, az oldatot 7,5 g aktív szénnel derítjük, szűrjük, és a szűrletet 35 ml forró etanollal mossuk. Az egyesített szűrletet és mosófolyadékot ismét forrásig melegítjük, 105 ml vizet adunk hozzá, majd lehűtjük. 16,9 g terméket kapunk, amelyet 3 g aktív szénnel végzett derítés közben 330 ml 5:1 arányú etil-acetát - etanol-elegyből átkristályosítunk. 10.2 g 202-204 C°-on olvadó 2,5-bisz(ciklohexil-amino)-l,3,4-tiadiazolt kapunk. 4. példa 2,5 Bisz(ciklopentil-amino)-l,3,4-tiadiazol előállítása 12,20 g (0,05 mól) 2,5-dibróm-l,3,4-tiadiazol és 17.03 g (0,2 mól) ciklopentil-amin 150 ml etanollal készített oldatát 15 órán át visszafolyatás közben forraljuk. A reakcióelegyet szárazra pároljuk, és a maradékot 150 ml vízzel elegyítjük. Az elegyet 3 órán át keverjük, majd a vízben oldhatatlan anyagot elkülönítjük, 50 ml toluollal elegyítjük, és erélyesen rázzuk. Az elegyet szűrjük, a szilárd anyagot toluollal kétszer mossuk, szárítjuk, majd vízzel mossuk. 9,72 g halványszürkés-cserszínű szilárd anyagot kapunk, amelyet 30 ml toluolból 10 g csontszénnel végzett derítés közben átkristályosítunk. 8,35 g cserszínűbarna szilárd anyagot kapunk. Ezt a szilárd anyagot 60 ml toluol és 90 ml heptán elegyéből átkristályosítjuk, az elegyet körülbelül 35 ml-re bepároljuk, majd a kristályos terméket toluollal egyszer és hexán-" nal kétszer mossuk. 5,26 g cserszínű, kristályos 2
