168121. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminoglikozid-antibiotikumok előállítására
168121 10 logy, 1963, 8-13. oldal) írták le. összehasonlító mintaként az 1000 ug/mg meghatározott hatékonyságú JI—20B antibiotikum bázis szolgál. Az összehasonlító anyag egy mikrogrammja 1 ml 0,1 mól-os foszfátpufferban 8,0 pH-nál 16,8 ±1,5 mm átmérőjű gátlási zónát ad. Amikor összehasonlító mintaként a fenti hatékonyságú JI— 20B antibiotikumbázist használjuk, a JI—20B antibiotikumszulfát hatékonysága 730jug/mg. A JI—20B antibiotikumbázissai-összehasonlítva a JI—20A antibiotikumbázis és a megfelelő szulfát hatékonysága 723 jug/mg-nak, illetőleg 527 /ig/mg-nak bizonyult. A csúcstermelés elérése után a fermentléből elkülönítjük a termelt antibiotikumot. Az elválasztásra a bázisos antibiotikumok elkülönítésének ismert módszereit, általában a megsavanyítás, szűrés, adszorpció, eluálás és bepárlás, például liofllizálás kombinációját használjuk. Az egyik jellegzetes elválasztási eljárás szerint a jelenlevő kalciumionokat oldhatatlan sóként kicsapjuk, a fermentlét előnyösen ásványi savval megsavanyítjuk, és a fermentlét szűréssel vagy centrifugálással derítjük. Közömbösítés után az antibiotikumterméket alkalmas kationcserélő gyantán, például ammónium fázisú, gyengén savas ioncserélő gyantán adszorbeálva extraháljuk, majd a gyantaoszlopból híg lúggal, előnyösen ammóniumhidroxid-oldattal eluáljuk, és az eluátumból bepárlással, például liofilizálással nyerjük ki az antibiotikumot. Típusos kationcserélő gyanta például az Amberlite IRC-50 és a Lewatit CNP (gyártja a Bayer AG., Leverkusen). Az elválasztást oldószeres extrahálással is végezhetjük. Ez a módszer előnyösen alkalmazható az antibiotikumtermék származékainak, például Schiff-bázis-származékának elkülönítésére. Az antibiotikumtermék elkülönítésére az aktívszénen való adszorbeálás is alkalmas. 5 A JI-20 komplex előnyösen kromatografálással választható szét komponenseire. Például a JI—20 komplexet kovasavgéloszlopon abszorbeáltatjuk, majd alkalmas eluálószerrel, például 1:1:1 arányú kloroform, metanol és tömény vizes ammóniaoldat 10 keverék alsó fázisával eluálunk. Az eluálást úgy követhetjük, hogy az eluátumból vett mintákat kovasavgél-vékonyrétegen ! kromatografáljuk, majd Staphylococcus aureus ATCC 6538 P mikroorganizmussal szemben bioautográfiai próbát végzünk. Az 15 azonos komponenst tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, és a komponenst elkülönítjük. Ilyen kromatografáló oszlopot és elulálószert alkalmazva, a JI-20 komplex komponensei gentamicin, JI-20B antibiotikum, JI-20A antibiotikum sorrendben tá-20 voznak az oszlopból. Az antibiotikumtermékek Amint az előzőekben említettük, a JI—20 komplex 25 gentamicint, JI-20A antibiotikumot és JI-20B antibiotikumot tartalmaz. A gentamicint alkotó Clt C 2 és C? a komponensek szerkezetét, fizikai-kémiai és biológiai tulajdonságait például az Infectious Diseases, 119,4. és 5. számában 30 közölték. A JI-20A és JI-20B antibiotikumok fizikai-kémiai tulajdonságait az 5. táblázatban foglaltuk össze. 5. táblázat JI-20AésJI-20B kémiai és fizikai tulajdonságai JI-20A JI-20B antibiotikum antibiotikum 1. Elemi összetétel (talált) szén 45,66% 46,47% hidrogén 8,18% 8,45% nitrogén 13,53%-13,93% 2. Bruttóképlet C19 H 39 N 5 0 9 • H 2 0 CÍOUUNSO«, • H2 0 3. Mágneses mag-rezonanciaspektrum az 1. ábrán a 2. ábrán 4. [a]g (0,3% vízben) + 160° + 172° 5. pKa 8,1 Szulfátsók 8,1 1. Elemi összetétel (talált) szén 30,64% 30,73% hidrogén 6,55% 6,70% nitrogén 8,78% 8,71% 2. Bruttóképlet C19 H 39 N s 0 9 • 2 1/2 C20 H 41 N 5 O 9 • 2 1/2 H2 S0 4 • 1 1/2 H 2 0 H2 S0 4 • 2H 2 0 3. Mágneses mag-rezonancic ispektrum a 3. ábrán a 4. ábrán 5
