167856. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminopenicillinek előállítására

17 167856 18 6. táblázat TenyésztésFelhasznált D-fenilglicinszármazék Mikroorganizmus hez használt táptalaj I. n. in. IV. v. VI. VII. VIII. Xanthomonas citri IFO 3781 F 5,0 5,0 5,0 3,2 1,9 2,9 3,8 5,0 Xanthomonas oryzae IFO 3995 F 5,5 5,0 5,0 3,0 1,5 3,1 3,0 4,8 Acatobacter sp. IFO 13209 G 5,5 4,2 4,2 3,5 1,9 2,5 3,2 5,2 Acetobacter pasteurianum IFO 3223 G 5,1 4,9 5,0 2,3 1,5 2,8 3,5 4,5 Acetobacter turbidans IFO 3225 G 5,5 5,0 5,2 2,5 U 3,1 3,8 4,8 Acetobacter xylinum IFO 3288 G 3,0 2,0 2,5 1,5 1,3 2,0 1,5 3,5 Mycoplana dimorpha IFO 13213 G 5,5 5,5 5,0 3,5 1,9 3,5 4,0 5,0 Protaminobacter alboflavus IFO 13211 G 1,6 1,6 1,9 1,8 1,1 1,8 1,5 1,8 A táblázat jelölései: I. =metilészter II. = etilészter III. = n-propilészter IV. = izopropilészter V.= terc-butilészter VI. = tioglikolészter VII. = D-fenilglicin-amid VIII. = D—N-a-fenilglicil-glicin A „G" táptalaj összetétele (pH =7,0): Vízmentesített Bacto—Nutrient táptalaj 0,8% Glükóz 1,0% NaCl 0,5%. 12. példa 50 térfogatrész „F" táptalajt (összetételét a 8. példában közöltük) Xanthomonas oryzae IFO 3998 törzzsel oltunk be, és az elegyet 24 órán át 28 C°-on rázzuk. A kapott tenyészettel 500 térfogatrész „F" táptalajt oltunk be, és az elegyet 24 órán át rázás közben 28 C°-on inkubáljuk. 1500 térfogatrész így kapott tenyészetből elkülönítjük a sejteket, a sejteket mossuk, majd 150 térfogatrész 0,1 mólos foszfátpufferoldatban (pH = 6,0) szuszpendáljuk. A szuszpenziót 3 részre osztjuk. Az egyes részletekhez 1—1 súlyrész 6-amino-penicillánsavat, 2—2 súlyrész D-fenilglicin-metilésztert, és 20—20 térfogatrész, a 7. táblázatban említett szerves oldószert adunk. Az elegyek végtérfogatát a fent említett foszfátpuffer-oldattal 100 térfogatrészre egészítjük ki. A kapott elegyeket — amelyeket a 7. táblázatban I., II. és III. rendszernek nevezünk — rázás közben 30 percig 28 C°-on inkubáljuk. A képződött a-amino-benzil-penicillin mennyiségét a 7. táblázatban Jcözöljük. 7. táblázat Rendszer száma I. II. III. 13. példa Szerves oldószer metanol etanol aceton Képződött a-amino-benzil-penicillin mennyisége, mg/ml 8,5 8,8 7,8 30 35 40 45 50 55 pott tenyészetekkel 300—300 térfogatrész „E" táptalajt oltunk be, és az elegyet rázás közben 40 órán át 28 C°-on tenyésztjük. Az egyes tenyészetekből centrifugálással elkülönítjük a sejteket, a sejteket 0,1 mólos citrát-foszfát-pufferoldattal mossuk, majd öt részre osztjuk. Az egyes részleteket 12 térfogatrész fent említett pufferoldatban szuszpendáljuk, és a szuszpenzióhoz 10 mg/ml 6-amino-penicillánsavat és (a) 20 mg/ml D-fenilglicin-metilésztert, (b) 20 mg/ml DL-1-ciklohexenil-glicin-metilésztert, (c) 20 mg/ml DL-ciklohexil-glicin-metilésztert, (d) 20 mg/ml DL-4-hidroxi-fenilglicin-metilésztert, illetve (e) 20 mg/ml DL-4-hidroxi-3,5-diklór-fenilglicin-metilésztert adunk. A kapott elegyeket rázás közben 1 órán át 37 C°-on inkubáljuk. " A képződött aminopenicillinek mennyiségét a 8. táblázatban közöljük. 8. táblázat Aminopenicillin, mg/ml Mikroorganizmus a' b' c' d' e' Pseudomonas sp. IFO 13214 0,9 0,8 0,5 2,5 2,3 Pseudomonas aeruginosa IFO 3755 0,8 0,8 0,8 2,8 3,1 Pseudomonas polycolor IFO 3918 0,6 0,5 0,5 2,9 3,2 Pseudomonas sp. IFO 13214 törzset (az 1. kísérletben ismertetett módon, talajból elkülönített mikroorganizmus), Pseudomonas aeruginosa IFO 3755 törzset és Pseudomonas polycolor IFO 3918 törzset ferde tenyészetben 2 napon át tenyésztünk, és a kapott tenyészetekkel 5 térfogatrész „E" táptalajt oltunk be. Az elegyet rázás közben 2 napig 28 C°-on tenyésztjük, majd a ka-Megjegyzés: az a'—e'jelzésű aminopenicillinek az 60 a—e jelzésű a-helyettesített-a-aminosav-származékok és 6-aminopenicillin reakciójával előállított termékek, azaz: a' = a-amino-benzil-1-penicillin, b' = 6-(a -amino- F-ciklohexenil-acetamido)-penicillán-65 sav 9