167726. lajstromszámú szabadalom • Eljárás O-szubsztituált 7-amino-3-CEFEM-3-OL-4-karbonsav-származékok előállítására

167726 41 42 így nyert 3-metoxi-7ß-fenilacetilamino-3-cefem-4-karbonsav-difenilmetilészter-1-oxidot — Rf = 0,31 (etilacetát rendszerben), op.: 152—155°, aceton-dietiléter elegyből történő átkristályosítás után ultraibolya abszorpciós spektrum (95%-os vizes etanolban): Xmax

= 288 mjA (s=3610) és AvaI1

=247 mji,, infravörös abszorpciós spektrum (metilénkloridban): jellemző sávok 2,94, 5,59, 5,81, 5,95, 6,22 és 6,61 ji.-nál — redukálva. A közbenső termékként képződő 3-metoxi-7 ß-fenilacetilamino-3-cefem-4-karbonsav-difenilmetilészter-l-oxidot a következőképpen is előállíthatjuk: A 3-hidroximetil-7 ß-fenilacetilamino-3-cefem-4-karbonsav nyers nátriumsójának 11,82 g-ját (ezt a vegyületet a 3-acetiloximetil-7 ß-fenilacetilamino-3-cefem-4-karbonsav Bacillus subtilis (ATCC 6633)-ből előállított enzimextraktum segítségével történő enzimatikus dezacetilezésével, és az ezt követő liofilizálással nyerhetjük) 200 ml vízben oldjuk, az oldatra 400 ml etilacetátot rétegzünk és a pH-t tömény vizes foszforsavval 2 értékre állítjuk. A vizes fázist elválasztjuk és kétszer 150—-150 ml etilacetáttal utánaextraháljuk. Az egyesített szerves extraktumokat négyszer 50—50 ml vízzel mossuk, magnéziumszulfát felett szárítjuk, majd körülbelül 400 ml térfogatúra pároljuk be. Az oldathoz fölös mennyiségű diazometánt adunk, 3 órán át hagyjuk állni szobahőmérsékleten, majd a szemcsés kristályú csapadékot leszűrjük. A szűrletet 200 ml térfogatúra pároljuk be, még melegen ciklohexánt adunk hozzá, ezután szobahőmérsékletűre hűtjük le, majd egy ideig 4°-on állni hagyjuk. A csapadékot leszűrjük és aceton-ciklohexán elegyből átkristályosítjuk, az így nyert 3-hidroximetil-7 ßfenilacetilamino-3-cefem-4-karbonsavdifenilmetilészter 176— 176,5°-on (korrekció nélkül)olvad,[a]g) =— 6°+ 1° (c = 1,231, kloroformban), vékonyrétegkromatogram (szilikagélen, kimutatás jódgőzzel vagy UV fénnyel) = 254 mjji, Rf

= 0,42 (kloroform-aceton 4 :

1 rendszerben), Rf

= 0,43 (toluol-aceton 2 :

1 rendszerben ) és Rf

= 0,41 (metilénklorid-aceton 6 : 1 rendszerben). 1,03 g 3-hidroximetil-7ß-fenilacetilamino-3-cefem-4--karbonsav-difenilmétilésztert és 1,05 g N-metil-N,N'-diciklohexilkarbodiimidiumjodidot oldunk nitrogénatmoszférában 25 ml abszolút tetrahidrofuránban, majd az oldatot 17 órán át hagyjuk állni nitrogénatmoszférában szobahőmérsékleten. A reakcióelegyről az oldószert forgó bepárlóban, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot metilénkloridban oldjuk, és 50 g szilikagélt (50% desztillált víztartalom) tartalmazó oszlopon át szűrjük, ezután négyszer 100—100 ml metilénkloriddal utánamossuk. Az eluátumot kis térfogatúra pároljuk be és egy szilikagél oszlopon (90 g, 10% desztillált víz hozzáadásával dezaktivált) kromatografáljuk. Összesen 900 ml 3 : 7 arányú toluol-metilénklorid eleggyel az apoláros szennyeződéseket eluáljuk, 2 részlet 200—200 ml metilénkloriddal történő eluálással a 3-jodmetil-7ß-fenilacetilamino-3-cefem-4--karbonsav-difenilmetilésztert nyerjük, a vékonyrétegkromatográfiásán egységes terméket benzolból liofilizáljuk, infravörös abszorpciós spektrum (metilénkloridban): jellemző sávok 3,00, 5,62, 5,82, 5,95, 6,70, 7,32 és8,16[A-nál. A fentiekben alkalmazott jódozó reagenst a következőképpen állíthatjuk elő: Egy 250 ml-es gömblombikban, amely mágneses keverővel, visszacsepegő hűtővel és nitrogént tartalmazó ballonnal ellátott 42 g frissen desztillált N,N'-diciklohexilkarbodiimidet oldunk 90 ml metiljodidban, nitrogénatmoszférában, szobahőmérsékleten és a színtelen reakcióelegyet 72 órán át keverjük 70° fürdőhőmérsékleten. A reakcióidő letelte után a most már vörösesbarna 5 oldatból a metiljodid felesleget ledesztilláljuk csökkentett nyomáson és a sűrűnfolyó vörösesbarna maradékot 40°-on oldjuk 150 ml abszolút toluolban. A néhány óra múlva spontán kikristályosodó kristálytömeget egy nitrogént tartalmazó ballonnal ellátott üvegszűrő segít-10 ségével a levegő kizárása mellett elválasztjuk az anyalúgtól, a reakcióedényt háromszor 25—25 ml abszolút toluollal kiöblítjük, ugyanezt a toluolt használjuk az üvegszűrőn levő enyhén sárga színű kristályos anyag színtelenre történő mosására. A terméket 20 órán át 15 szárítjuk 0,1 Hgmm nyomáson, szobahőmérsékleten, így az N-metil-N,N'-diciklohexilkarbodiimidiumjodidot színtelen kristályos anyag alakjában nyerjük, op.: 111— 113°, infravörös abszorpciós spektrum (kloroformban): jellemző sávok 4,72 és 6,00 jx-nál. 20 0,400 g 3-jodmetil-7ß-fenilacetilamino-3-cefem-4-karbonsav-difenilmetilészter 15 ml 90%-os vizes ecetsavas oldatát jégfürdőben 0°-ra hűtjük le és erős keverés közben részletenként 2,0 g cinkforgácsot adunk hozzá. A reakcióelegyet 30 percen át tartjuk 0°-on, a változatlan 25 cinkforgácsot egy diatomaföld feltéttel ellátott szűrőn kiszűrjük, a szüredéket többször friss metilénkloriddal szuszpendáljuk és ismét szűrjük. Az egyesített szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, abszolút toluolt adunk hozzá és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 30 A maradékot 50 ml metilénklorid és 30 ml 0,5 mólos vizes dikáliumhidrogénfoszfátoldat elegyében oldjuk, a vizes fázist elválasztjuk, majd két részlet 30—30 ml metilénkloriddal extraháljuk, végül elöntjük. A szerves extraktumokat többször mossuk telített vizes nátrium-35 kloridoldattal, magnéziumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 22 g szilikagéllel (10% vízadalék) töltött oszlopon kromatografáljuk. A 3-metilen-7ß-fenilacetilamino-cefem-4<x-karbonsav-difenilmetilésztert metilénkloriddal és 2% metil-40 acetátot tartalmazó metilénkloriddal eluáljuk, majd metilénklorid-hexán elegyből átkristályosítjuk, op.: 144—147°, Mg1

= —18° ± 1° (c = 0,715, kloroformban),ultraibolya abszorpciós spektrum (95%-os vizes etanolban): Xmax

= 254 m[i. (s = 1540) és 260 mjj. (s = 1550), 45 infravörös abszorpciós spektrum (metilénkloridban): jellemző sávok 2,94, 5,65, 5,74, 5,94, 6,26 és 6,67 jx-nál. 1,0 g 3-metilen-7ß-fenilacetilamino-cefam-4a-karbonsav-difenilmetilészter 250 ml metilénkloridos oldatát —70°-on oxigén-ózon (0,265 mmól ózon/perc) eleggyel 50 kezeljük 8 és fél percen át, majd 1 ml dimetilszulfidot adunk hozzá. A reakcióelegyet 30 percen át keverjük —70°-on, majd 1,5 órán át szobahőmérsékleten, végül csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradék a 7ß-fenilacetilammo-cefam-3-on-4^-karbonsav-difenil-55 metilészter-1-oxid és a 7 ß-fenilacetilamino-cefam-3-on-4£-karbonsav-difenilmetilészter keveréke, és ezeket a vegyületeket preparatív vékonyrétegkromatográfiával izolálhatjuk, Rf = 0,31 (szilikagélen, etilacetát rendszerben). 60 A 7ß-fenilacetilamino-cefam-3-on-4£-karbonsav-difenilmetilészter-1-oxidot a következőképpen is előállíthatjuk: 0,50 g 3-metilén-7 ß-fenilacetilamino-cefam-4a-karbonsav-difenilmetilészter 50 ml metilénkloridos oldatát 65 0°-ra hűtjük le, majd 0,19 g 3-klórperbenzoesav 10 ml 21