167616. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusellenes hatású komplex előállítására
17 167616 18 — A vékonyréteg-kromatografálással kapott 5. és 10. frakciót egyesítjük és 2 ml etilacetátban oldjuk. Az oldatból petroléterrel történő lecsapás útján 60 mg szilárd C-szirodezmint kapunk. A száraz oszlop-kromatográfiával kapott 6. frakciót ugyancsak vékonyréteg-kromatográfiai szétválasztásnak vetjük alá (6 lemezen, a II. oldószer-rendszerrel), így 11. frakcióként 193 mg olajszerű B-szirodezmint kapunk, amelyből benzollal és petroléterrel való kezelés útján 113 mg szilárd B-szirodezmint választhatunk le. 3. példa Egy 90 literes fermentációból termékként kapott 2,5 g komplex vírusellenes hatóanyagot 50 ml vízmentes piridinben 5,0 ml tíonil-kloriddal kezelünk 0 °C hőmérsékleten, 15 percig, majd az elegyet beleöntjük 500 ml jeges vízbe és további 15 percig állni hagyjuk. Az elegy pH-értékét 2 n kénsavoldattal 2-re állítjuk be, majd 3 x 500 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatokat egyesítjük, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. 1,43 g olajszerű maradékot kapunk; ezt 430 g szilikagéllel töltött „száraz oszlopon" kromatografáljuk az alábbi módon: Egy kétliteres lombikba beviszünk 1 kg szilikagélt (a Hopkin and Williams Ltd. cég „M.F.C." jelű készítménye) és 120 ml vizet, majd a lombikot szobahőmérsékleten 2 óra hosszat forgatjuk. Ezután 112,5 ml 2:1 arányú etilacetát-toluol elegyet adunk a lombik tartalmához és további 3 óra hosszat forgatjuk. Az így előkészített szilikagélt az oszlopba töltjük, a kromatogramot etilacetát és toluol 2:1 arányú elegyével futtatjuk, majd 9 részre osztjuk fel és mindegyik részt 3 x 500 ml 97:3 arányú etilacetátmetanol eleggyel eluáljuk. Az A-szirodezmint tartalmazó frakciókat egyesítjük és vékonyréteg-kromatográfiás szétválasztásnak vetjük alá („G.F." szilikagél lemezeken, etilacetát és toluol 2:1 arányú elegyével). A frakciók hatóanyag-tartalmát vékonyréteg-kromatográfiás analízissel az első táblázat 1. sz. vegyületénél megadott oldószer-rendszer felhasználásával végezzük el. Az A-szirodezmint tartalmazó frakciókat egyesítjük. Ily módon 218 mg tiszta A-szirodezmint kapunk olajszerű termék alakjában. Egy további 90 literes fermentációból, petroléterrel mosott toluolos kivonat alakjában kapott terméket az előzőekben leírt eljáráshoz hasonló módon kezelünk és az itt kapott A-szirodezmint egyesítjük a fent leírt módon kapott A-szirodezminnel. Ezt az összesen 505 mg terméket 5 ml benzolban oldjuk és 60—80 C° forráspont-tartományú petroléter cseppenként történő hozzáadása útján az A-szirodezmint leválasztjuk. Ily módon 385 mg szilárd A-szirodezmint kapunk. 4. példa 50 mg B-szirodezmint 1,0 ml vízmentes piridinben 0,1 ml tionil-kloriddal kezelünk 0 C° hőmérsékleten 12 percig, majd az elegyet beleöntjük 25 ml jeges vízbe és 15 percig állni hagyjuk. Az oldat pH-értékét 2 n kénsavoldattal 2-re állítjuk, majd 3 x 20 ml kloroformmal extraháljuk a savas oldatot. A kloroformos kivonatokat egyesítjük, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. 29,4 mg olajszerű terméket kapunk, amely túlnyomórészt A-szirodezminből áll, B- és C-szirodezmin nyomaival szennyez-5 ve. Ezt a nyers terméket preparatív vékonyréteg-kromatográfiával tisztítjuk, „G.F." szilikagél-lemezen, hangyasav, metanol és kloroform 1:4:95 arányú elegyéből álló oldószer-rendszerrel. Ily módon 12,5 mg olajszerű A-szirodezmint kapunk. 10 5. példa 5,0 mg C-szirodezmint 0,1 ml vízmentes piridin-15 ben 0,01 ml tionil-kloriddal kezelünk 10 percig 0 °C hőmérsékleten, majd az elegyet beleöntjük 5 ml jeges vízbe és 15 percig állni hagyjuk. Az oldat pH-értékét 2 n kénsavoldattal 2-re állítjuk, majd 3 x 5 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonato-20 kat egyesítjük, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Ily módon 4,3 mg A-szirodezmint kapunk olajszerű termék alakjában. 25 6. példa 250 mg A-szirodezmint 9,5 ml vízmentes piridinben 6,25 ml ecetsavanhidriddel reagáltatunk szoba-30 hőmérsékleten, egy hétig sötétben tartva a reakcióelegyet. Ezután 5 °C hőmérsékleten 1,25 ml vizet adunk hozzá és az elegyet 1 óra hosszat ezen a hőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegy pH-értékét 2 n kénsavoldattal 2-re állítjuk be, majd 25 ml 35 vízzel hígítjuk és 4 x 50 ml etilacetáttal extraháljuk a reakcióelegyet. Az etilacetátos kivonatokat egyesítjük, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. 280 mg olajszerű terméket kapunk, ezt preparatív vékonyréteg-kromatográfiával tisztítjuk, szilikagél-4® lemezen, hangyasav, metanol és kloroform 1:4:95 arányú elegyét tartalmazó oldószer-rendszerrel. Az így kapott fő-komponenst etilacetát és petroléter elegyéből kétszer átkristályosítjuk; 127 mg A-szirodezmin-bisz-acetátot, azaz két további, összesen 3-^5 acetil-csoportot tartalmazó vegyületet kapunk, 186-189 C°-on olvadó halványsárga tűkristályok alakjában. A kívánt terméket azon lemezről eluáljuk, mely az első táblázat 11. sz. vegyületének megfelelő Rf értéket ad. 7. példa 55 50 mg A-szirodezmin és 15 mg kén 2 ml piridinnel készített oldatát szobahőmérsékleten sötétbén 24 óra hosszat állni hagyjuk, majd 35 C hőmérsékleten szárazra pároljuk. Az így kapott terméket preparatív 60 vékonyréteg-kromatográfiás szétválasztásnak vetjük alá (egy 40 x 20 x 0,1 cm méretű „G.F." jelű szilikagél-lemezen, etilacetát és toluol 2:1 arányú elegyét tartalmazó oldószer-rendszerrel); a megfelelő frakciók feldolgozása útján A-, B- és C-szirodezmint 65 kapunk, A frakciók elválasztását vékonyréteg-kromatográfiás úton, az első táblázatban megadott oldószerrendszerben végezzük el.
