167528. lajstromszámú szabadalom • Eljárás G-418, verdamicin I, sziszomicin és gentamicin A antibiotikumokat tartalmazó keverék és alkotórészei előállítására

29 167528 30 például Saccharomyces, Candida, Aspergillus és Trichophyton fajokkal szemben azonban mindkét antibiotikum hatástalan. Az antibiotikumokat és gyógyászatilag elfogadható származékaikat in vivo és in vitro körülmények között lehet használni. Alkalmazhatók a fent leírt mikroorganizmusok antibiotikummal szemben érzékeny fajainak gátlására vagy elpusztítására, valamint szappanokban és tisztítószerekben az ilyen mikroorganizmusoknak laboratóriumi eszközök, sebészeti műszerek, laboratóriumi üvegedények stb. felületéről való eltávolítására. Tekintettel in vivo hatásosságukra, az antibiotikumok és gyógyászatilag elfogadható származékaik emlős gazdaállatokban, például egerekben, patkányokban, macskákban, kutyákban és szarvasmarhákban az érzékeny mikroorganizmusok kiirtására vagy gátlására használhatóknak bizonyultak. Ezek az antibiotikumok és gyógyászatilag elfogadható származékaik mikroorganizmusok által emberekben okozott betegségek gyógyítására is használhatók. Az in vivo használatra való kikészítésükre a G-418 vagy verdamicin I antibiotikumot, illetve gyógyászatilag elfogadható származékukat a terápiás adagolásra alkalmas alakra hozzuk, például azáltal, hogy a szokásos vivőanyaggal vagy kötőanyaggal keverjük. A találmány tehát felöleli olyan gyógyszerkészítmények előállítását, amelyek hatóanyagként a G-418, verdamicin I és gyógyászatilag elfogadható származékaik közül egyet vagy többet vivőanyaggal vagy kötőanyaggal együtt tartalmaznak. A készítmény egység adag, például tabletta alakban lehet. Előnyös azonban, ha a készítményt injekciós ampullák vagy kenőcsök vagy krémek tartalmazzák. 1. példa Antibiotikum termelése rázólombikban M. griseaval a) Oltóanyag előállítása Ferde agaros tenyészetből kaccsal levett Micromonospora griseaval beoltunk egy 300 ml-es lombikban levő következő összetételű 100 ml steril táptalajt: A táptalaj Húskivonat 3 g triptóz 5 g élesztőkivonat 5 g glükóz 1 g keményítő 24 g kalciumkarbonát 2 g csapvíz 1000 ml A lombikot forgó rázógépen 250—300 percenkinti fordulattal állandóan rázatva 25—35 C°-on inkubáljuk jelentékeny tenyészet kifejlődéséig. Ez rendszerint 1—4 napig tart. b) Fermentálás « Az a) szakaszban előállított oltóanyaggal beoltunk egy 2 literes lombikban levő következő össze-5 tételű 500 ml táptalajt: B táptalaj szójababliszt 30 g dextrin 50 g glükóz 5 g 10 kalciumkarbonát 7 g csapvíz 1000 ml A beoltott táptalajt percenkint 200-300 fordulatú rázógépen állandóan keverve 4-7 napig 15 26-35 C°-on fermentáljuk. Az első 48 óra után időnkint mintát veszünk a fermentléből, hogy megállapítsuk a maximális antibiotikus hatékonyság elérését, azután a fermentlevet a 4. példa szerint feldolgozzuk. 2. példa 25 Micromonospora grisea fermentálása 14 literes kádban a) Szaporítás 30 2 literes Erlenmeyer-lombikban levő 500 ml steril táptalajt beoltunk 25 ml 1. példa szerint előállított oltóanyaggal és percenkint 280 fordulattal állandóan keverve 28 C°-on 2-4 napig inkubáljuk. 35 b) Fermentálás 14 literes fermentáló kádban levő 10 liter steril B táptalajhoz hozzáöntjük a szaporító lombik egész 40 tartalmát. A keveréket 250-500 percenkinti fordulattal állandóan keverve 35 C°-on 90 óra hosszat inkubáljuk. Fermentálás közben a pH-t 7,2 és 8,3 között tartjuk, és a táptalajon percenkint 3-5 liter levegőt vezetünk át. Az első 48 óra után időnkint 45 mintát veszünk a fermentléből, hogy megállapítsuk a maximális antibiotikus hatékonyság elérését, azután a fermentlevet a 4. példa szerint feldolgozzuk. 3. példa Micromonospora grisea fermentálása 55 95 literes kádban Beoltás C táptalaj élesztőkivonat 5,0 g 6° húskivonat 3,0 g tripton 5,0 g burgonyakeményítő 24,0 g cerelóz 1,0 g kalciumkarbonát 1,0 g 65 víz 1,0 liter • 15 •