167411. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízoldhatatlan fehérje-készítmények előállítására
13 167411 14 2 b) példa 6 g 2 a) példa szerint előállított hordozógyantát az 1 b) példa szerint 590 E penicillin-acilázzal 165 ml vízben reagáltatunk. A reakció eredményeként a következő enzimaktivitásokat állapítjuk meg (NIPAB-teszt): Kiindulási oldat: 590 E Felülúszó rész + mosóvíz: 26 E Hordozógyanta a reakció 352 E, után: vagyis a kiindulási aktivitás 60%-a. 2 c) példa 1 g 2 a) példa szerint előállított hordozógyantát az 1 b) példával analóg módon 100 mg aszparaginázzal reagáltatjuk. A mért enzimatikus aktivitások (aszparagin-hidrolízis): Kiindulási oldat: 21 000 E Felülúszó rész a reakció 3 360 E után: Hordozógyanta a reakció 3 910E, után: vagyis a kiindulási aktivitás 19%-a. 2 d) példa számítva 0,85% nitrogént tartalmaz, 5,52% fehérjét tartalmaz, ez 65 mg összfehérje-tartalomnak felel meg. 3 a) példa 90 g dietilénglikol-dimetakrilát 10 g maleinsavanhidriddel végzett kopolimerizációját a 2 a) példa 10 szerinti feltételek mellett végezzük, amikor is a következő eredményhez jutunk: Hozam: 96 g Térfogatsúly: 5,5 ml/g 15 Duzzadási térfogat vízben: 6,7 ml/g Fajlagos felület: 9,2 m2 /g Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után: 1,9 milliekvivalens/g. 20 3 b) példa 1 g 3 a) példa szerint előállított hordozógyantát 50 mg nem specifikus elasztáz 32 ml vízben készült 25 oldatához adunk, amelynek enzimatikus aktivitása 139 E. A reakcióelegyet 16 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, mimellett állandó 5,8 pH-értéket tartunk fenn. A reakció lezajlása után a gyantát leszívatjuk és 50 ml In nátrium-30 klorid-koncentrációjú 7,5 pH-értékű 0,05 mólos foszfátpufferrel, majd 50 ml 7,5 pH-értékű 0,05 mólos foszfátpufferrel mossuk. lg 2a) példa szerint készült hordozógyantát vízmentes acetonban mosunk és leszívatunk. Az 35 acetonból még nedves gyantát 20 ml vízben szuszpendáljuk és a 0,2 n nátriumhidroxiddal feltöltött, 6,2 pH értékre beállított automata titráló berendezést bekapcsoljuk. Amikor a műgyanta szuszpenzió 5,8-6,0 pH értéket ér el, akkor 100 mg 40 szarvasmarhaszérumalbumin tiszta vízben készült oldatát adjuk hozzá. A szuszpenziót 6,2 állandó pH-értéken 20 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A gyantát végül G 3 jelű zsugorított üvegszűrőn leszívatjuk és 50-50 ml 0,05 mólos, 7,5 pH 45 értékű és 1 mól nátriumkloridot tartalmazó, valamint ilyen nátriumkloridtól mentes foszfátpufferral kimossuk. A mosóoldatokkal egyesített felülúszó részben a biuret-módszerrel meghatározva a fehérje tartalom 70mg-nak adódik. A mosott műgyanta 50 szárazsúlyra számítva (1,083 g) 0,4% nitrogént tartalmaz, amely 2,48% vagy összesen 27 mg összfehérje-tartalomnak felel meg. 55 2e) példa 1 g 2 a) példa szerint előállított hordozógyantát a 2 c) példával analóg módon 100 mg Cytochrom 60 c-vel reagáltatunk és a fenti módon feldolgozzuk. A felülúszó részben és a mosóoldatokban a biuret-módszerrel meghatározva 12 mg protein található. A mosott 4,5 g gyanta 1,175 g száraz súlyra 65 A kapott eredmény a következő: Kiindulási oldat: 139 E Felülúszó rész és 51 E mosóoldatok: Hordozógyantához 15E, rögzítve: vagyis a kiindulási aktivitás 11%-a. Az utóbbi esetben fz enzimatikus aktivitást kazein szubsztrátummal (koncentráció 11,9 mg/ml) 8,0 pH-értéken 25 C°-on határozzuk meg. 1 egység (E) megfelel 1 mikromól káliumhidroxid fogyasztásnak 1 perc leforgása alatt. 3 c) példa 1 g 3 a) példa szerint előállított hordozógyantát 50 mg kristályos ureáz (Merck) 32 ml vízben készült oldatához adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16 óra hosszat keverjük, miközben a pH-értéket 6,3 értéken tartjuk. A feldolgozást a 2 d) példa szerint végezzük. A kapott eredmény a következő: Kiindulási oldat: 5 013E Felülúszó rész és 1 397 E mosóoldatok: Hordozógyantához 1 405 E, rögzítve: vagyis a kiindulási aktivitás 28%-a. 7
