167411. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízoldhatatlan fehérje-készítmények előállítására

15 167411 16 Az ureáz enzimatikus aktivitását titrimetriás úton 0,17 mólos karbamid szubsztrátummal 25 C°-on és 6,5 pH-értéken határozzuk meg. 1 egység (E) megfelel olyan enzimmennyiségnek, amely 1 mikromól karbamid elbontására 1 perc leforgása alatt képes. 3 d) példa 0,4 g 3 a) példa szerint előállított hordozógyantát 40 mg glutationnal 32 ml vízben 16 óra hosszat 6,3 konstans pH-értéken szobahőmérsékleten reagáltatunk. A gyantát leszívatjuk és 1 n nátriumkloridot tartalmazó 7,5 pH-értékű 0,05 mólos foszfátpufferrel, végül vízzel mossuk. A gyanta vákuumos szárítása után 100C°-on foszforpentoxid felett 0,47 g terméket kapunk. A Dumas szerint végzett nitrogén meghatározás során 1,5% nitrogén-tartalom adódik, amely 8,04% nitrogénnek vagy 37,8 mg glutationnak felel meg. Az utóbbi mennyiség a bevitt glutation 94%-át teszi ki. Enzimatikus aktivitás értékek: 4 a) példa ű 15 20 25 80 g tetraetilénglikol-dimetakrilát, 20 g maleinsavanhidrid és 1 g Porofor N keverékét 1 liter benzolban feloldjuk, majd lassú keverés közben 16 óra hosszat 80C°-on polimerizáljuk. A polimereket az 1 a) példával analóg módon dolgozzuk fel. Hozam: 95 g Térfogatsúly: 2,5 ml/g Duzzadási térfogat: 3,0 mg/g Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után: 2,6 milliekvivalens/g. 40 4 b) példa 1 g 4 a) példa szerint előállított penicillin-acilázt tartalmazó hordozógyanta reakcióját az 1 b) példával analóg módon végezzük, amikor a 45 következő eredményhez jutunk: Enzimatikus aktivitás értékek (NIPAB-teszt): Kiindulási oldat: Felülúszó rész és mosóoldatok: Hordozógyanta a reakció után: 4 c) példa 123 E 50 13E 79 E, vagyis a kiindulási aktivitás 64%-a. 55 Kiindulási oldatban: 44 E Felülúszó részben és 5,2 E mosóotdatokban: A hordozógyantához 8,3 E, rögzítve: vagyis a kiindulási aktivitás 19%-a. 10 Az enzimatikus aktivitást Tuppy szerint kolorimetriásan határozzuk meg (Z.,Physiol. Chem. 329, 1962 p 278) benzoil-arginin-p-nitroanilid (BAPNA) szubsztrátum felhasználásával. 1 egység (E) 1 mikromól szubsztrátum elbontására 25 C°-on, 7,8 pH-értéken képes. 4 d) példa 1 g 4 a) példa szerint előállított gyantát 50 mg nem specifikált elasztáz 32 ml vízben készített oldatához adunk. A szuszpenziót 16 óra hosszat szobahőmérsékleten 5,8 pH-érték állandóan tartása mellett keverjük. A feldolgozást és a kazein-szubsztrátummal kivitelezett titrimetriás enzimaktivitás meghatározást a 3 b) példa szerinti módon végezzük. Enzimatikus aktivitás értékek: 30 A kiindulási oldatban: 139 E A felülúszó részben és a 32 E mosóoldatokban: A hordozógyantához 36 E, rögzítve: vagyis a kiindulási aktivitás 26%-a. 35 4 e) példa 1 g 4 a) példa szerint előállított hordozógyantát 100 mg hemoglobin 30 ml vízben készült oldatához adjuk. A szuszpenziót 20 óra hosszat szobahőmérsékleten 6,2 állandó pH-érték mellett keverjük. A feldolgozást és a műgyanta mosását a 2 d) példa szerint végezzük. A szűrlet és a mosóvíz 39,6 mg fehérjét tartalmaz. A műgyanta 1,223 g szárazsúlyra számítva 22 mg összfehérjét tartalmaz. 4 f) példa 1 g 4 a) példa szerint előállított hordozógyantát 100 mg kazein 30 ml vízben készült oldatához adunk. A szuszpenziót szobahőmérsékleten keverjük és 0,2 n nátriumhidroxid hozzáadásával 6,2 pH-értéken tartjuk. 20 óra reakcióidő után a reakcióelegyet a 2d) szerinti módon feldolgozzuk. A szűrletben és a mosóvízben 18 mg fehérjét találtunk. A műgyanta 1,196 g szárazsúlyra számítva 34 mg kazeint tartalmaz. Enzimatikus aktivitás értékek: 0,4 g 4 a) példa szerint előállított hordozó- 60 gyantát 40 mg tripszin 32 ml 0,01 mólos kalciumkloridban készült oldatához adunk és az elegyet 16 óra hosszat szobahőmérsékleten 6,3 pH-érték állandó betartása mellett keverjük. A kapott gyan tát leszívatjuk és az 1 b) példa szerint mossuk. 65 A kiindulási oldatban: 139 E A felülúszó részben és a 32 E mosóoldatokban: A hordozógyantához 36 E, rögzítve: vagyis a kiindulási aktivitás 26%-a.