167361. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxokobalamin és sóinak előállítására

5 167361 6 hidroxokobalamin-bázist 1 : 1 térfogatarányú fenol-kloroform eleggyel extraháljuk. A szerves oldószerelegyből a szennyező anorganikus sókat desztillált-vizes mosással eltávolítjuk, majd a hatóanyagot a fenol-kloroformos oldatból aceton, kloroform és víz hozzáadásával vizes fázisba visszük. A továbbiakban vagy aceton hozzáadásával kristályos hidroxokobalamin-bázist kapunk, vagy valamely szerves sav, például glicin, aszparaginsav, glutaminsav, pantoténsav, fólsav hozzáadásával a kívánt hidroxokobalamin-sóvá alakítjuk, majd acetonnal kristályosan leválasztjuk. Ily módon lehetővé válik a hidroxokobalamin egyszerű, szennyezésmentes előállítása, valamint bármely kívánt só közvetlen képzése. A találmány szerinti eljárással enyhén savanyú közegben állítjuk elő a hidroxokobalamint és sóit, így ez az átalakítás mentes a különféle karbonsavas származékok és hasadási termékek képződésének veszélyétől, amikoris az eddig ismert eljárásokhoz viszonyítva lényegesen tisztább és egységesebb termékhez jutunk. A jelen találmányi leírás műszakilag rendkívül egyszerű és könnyen kivitelezhető megoldást ad hidroxokobalamin és sói közvetlenül előállítására. Az eljárás további előnye, hogy a reakció egy lépésben zajlik le, és elégtelen átalakítás esetén is szennyezésként csupán egy terméket, a nitritokobalamint tartalmazza, mely viszont, mint elektroneutrális kobalamin karboximetil-cellulóz vagy Sephadex alkalmazásával jól elkülöníthető az elektropozitív hidroxokobalamintól, illetve sóitól. így közvetlenül szennyezésmentes hidroxokobalamint, illetve hidroxokobalamin sókat kapunk, szemben a 974 284 számú angol szabadalmi leírással, mely szerint lényegesen többfajta szennyezés jelenlétével kell számolnunk. A jelen eljárás előnye még az is, hogy közvetlenül a kívánt hidroxokobalamin-sót — egyéb savmaradék szennyeződéstől mentesen — tudjuk előállítani minden további tisztítási művelet mellőzésével. A kapott termék eléri a terápiás felhasználáshoz szükséges gyógyszerkönyvi tisztaságot. A hidroxokobalamin-acetát és -klorid sók elsősorban parenterális alkalmazásnál önmagukban, vagy a B-vitamin csoport egyes tagjaival együtt kerülnek felhasználásra. A hidroxokobalamin-klorid ezenkívül perorálisan adagolt készítményeknél így tabletták, vagy szirupok készítésénél kerül előtérbe. A hidroxokobalamin-formiát só pedig kifejezetten gyulladáscsökkentő és fájdalomcsillapító hatással rendelkezik 710 676 számú japán szabadalmi leírás. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kivitelezését az alábbi példák szemléltetik. 1. példa 5g kristályos nitrito-kobalamint 150 ml 75 C°-os desztillált vízben feloldunk. Az oldatot 60C°-ra hűtjük le, majd állandó keverés közben több részletben 5 g ammónium-klqrid és 2,5 g hidroxil-ammónium-klorid keverékét adagoljuk hozzá és az oldat pH értékét 10%-os sósav oldattal 4,0-re állítjuk. Két óra múlva a keverést megszüntetjük, majd az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük le, és a 5 képződött hidroxokobalamint először 40 ml majd 20 ml, végül 10 ml 1 : 1 térfogatarányú fenol-kloroform eleggyel a sós-vizes oldatból kirázással mennyiségileg a szerves oldószeres fázisba visszük át. Az egyesített fenol-kloroformos oldatot fél 10 térfogatnyi desztillált vízzel összerázzuk, majd a szerves oldószeres fázist elválasztjuk, és a vizes fázist 15 ml 1:1 térfogatarányú fenol-kloroform eleggyel összerázzuk. A hatóanyagtartalmú szerves fázisokat egyesítjük, 210 ml kloroformot, 150ml 15 acetont és 30 ml desztillált vizet adunk hozzá, összerázzuk, majd a fázisok elválasztása után a kirázást 20 ml desztillált vízzel megismételjük. A vizes fázisokat egyesítjük, pH értékét néhány csepp 10%-os sósav oldattal 4,0-re állítjuk, szűrjük, majd 20 acetonnal zavarosodásig feltöltjük. Később az aceton-víz térfogatarányát 10 : l-re növeljük. Másnap a kivált kristályokat szűrjük, majd szárítjuk. 4,85 g kristályos, 96,0% hatóanyagtartalmú hidr-25 oxokobalamin-kloridot kapunk. A kiértékelést a British Pharmacopoeia 1968 „Hydroxocobalamin" cikkelye alapján (475. oldal) végezzük, azzal a különbséggel, hogy a specifikus extinkciót 190-es értékkel vesszük figyelembe. 30 Kitermelés: 97,0%. 2. példa: 35 Az 1. példa szerint járunk el azzal a változtatással, hogy 5 g kristályos nitrito-kobalamint tartalmazó vizes oldat megbontására 5 g ammóniumacetátot és 2,5 g hidroxil-ammóniumacetátot alkalmazunk, és az oldat pH értékét 10%-os 40 ecetsavval 4,2-re állítjuk. További változtatás, hogy a fenol-kloroformos tisztítás után a hatóanyagtartalmú vizes oldat pH értékét 10%-os ecetsavval, 4,0-re állítjuk. 4,3 g kristályos, 95,5% hatóanyagtartalmú hidr-45 oxokobalamin-acetátot kapunk. A kiértékelést a British Pharmacopoeia 1968 „Hydroxocobalamin" cikkelye alapján (475. oldal) végezzük, azzal a különbséggel, hogy a specifikus extinkciót 186,7 értékkel vesszük figyelembe. 50 Kitermelés: 86,0%. 3. példa: 55 Az 1. példa szerint járunk el azzal a változtatással, hogy az 5g kristályos nitritokobalamint tartalmazó vizes oldat megbontására 5 g ammónium-szulfátot és 2,5 g hidroxil-ammónium-szulfátot alkalmazunk, és az oldat pH értékét 10%-os 60 kénsawal 4,2-re állítjuk. További változtatás, hogy a fenol-kloroformos tisztítás után a hatóanyagtartalmú vizes oldat pH értékét 10%-os kénsawal 4,0-re állítjuk. 4,4 g kristályos, 95,5% hatóanyagtartalmú hidr-65 oxokobalamin-szulfátot kapunk. A kiértékelést a 3