167276. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-27106 jelű metabolit előállítására

167276 3 4 ban, Iowa State University Press, Ames, la., 1056—1096. oldal). A coccidiosis-os megbetegedésekből adódó nagy gazdasági veszteségek és egyes ismert, a coccidiosis-t gátló vegyület használatával járó nehézségek miatt állandóan folyik jobb coccidiosis-ellenes vegyületek után a kutatás. A monensin előállítása, amelyből az A 27106 jelű vegyületet a találmány értelmében előállítjuk, a 3 501 568 számú USA-beli szabadalmi leírás tárgya (a monensin az A 3823 jelű keverék A jelű összetevője). A monensin szintén coccidiosis-ellenes szer. A találmány szerinti eljárással előállított, biológiailag hatásos vegyületet önkényes A 27106-nak neveztük el. Az A 27106 a leírásban nátriumsót jelöl. Sóként előállítjuk továbbá az ammónium-, lítium-, kálium-, rubidium- és céziumsót, továbbá előállítjuk a szabad savat. A találmány szerinti eljárás értelmében az A 27106 metabolit előállítására a monensinből indulunk ki, amelynek nátriumsójának szerkezetét az I képleten mutatjuk be. A monensin nátriumsójának Streptomyces cinnamonensisszel való előállítására vonatkozóan lásd a 3 501 568 számú USA-beli szabadalmi leírást. Az A 27106 jelű vegyületet vagy a monensinből vagy a monensin előállítására használt micéliumos tenyészléből, glükóz jelenlétében a Streptomyces candidus faj egy új törzsének enzimével vagy enzimeivel állítjuk elő. Az új törzset a Northern Utilization Research and Development Division, Agricultural Research Service, United States Department of Agriculture, 1815. North University Street, Peoria, Illinois 61604. állandó törzsgyűjteményében letétbe helyeztük, ahol az NRRL 5449 sorszámot kapta, és ahonnan bárki számára hozzáférhető. A mikroorganizmusok közé tartozó Streptomycesek taxonómiai vizsgálatának bizonytalanságai miatt minden esetben számolnunk kell egy újonnan felfedezett mikroorganizmus azonosításának pontatlanságával. A monensint A 27106 jelű metabolittá átalakító NRRL 5449 sorszámú organizmus azonban a legfontosabb rendszertani tulajdonságok alapján a legközelebb a Streptomyces candidus (Kraszü'nikov) Waksman 1953. fajhoz áll. A típuskultúrát Waksman írja le a „The Actinomycetes" című munka 2. kötetében, a 187. oldalon (Williams and Wilkins, Baltomire, 1961). A típuskultúra az Institute of Microbiology of Rutgers University, New Brunswick, N. J. törzsgyűjteményében is megtalálható IMRU 3416 sorszám alatt. A találmány szerinti eljárás során használt mikroorganizmust ezen mikroorganizmus új törzsének találtuk. Bár a Str. candidus NRRL 5449 és az ismert törzs az általános micéliális morfológiában és színben, továbbá a spórák megjelenésében megegyezik, elegendő különbség található köztük ahhoz, hogy a találmány szerinti eljárás során használt törzset új törzsnek nyilváníthassuk. így például az ismert törzs nem koagulálja a tejet és lassan folyósítja a zselatint, az új törzs viszont a 14. nap elteltével csapadékot képez a tejben és 21 napig a zselatint nem folyósítja el. Ami a legfontosabb, az IMRU 3416 törzsből kitenyésztett tenyészet a monensint nem alakítja át A 27106 metabolittá. A monensint A 27106 metabolittá alakító mikroorganizmust a törökországi Ararát hegységben gyűjtött földmintából izoláltuk oly módon, hogy a földminta egy részét steril desztillált vízben szuszpendáltuk, a szuszpenziót pedig táp-agarra szélesz-5 tettük. A beoltott agar-lemezeket 25—35 °C hőmérsékleten addig inkubáltuk, amíg látható telepek fejlődtek. Az inkubációs idő végén az elkülönített mikroorganizmusok telepeit steril platina kaccsal férde-agarra oltottuk. A ferde-agar-tenyészetek 10 egyikét megfelelő mennyiségű NRRL 5449/inokulum előállítására inkubáltuk. A Str. candidus NRRL 5449 rendszertani helyének meghatározását az „International Cooperative Project for Description and Deposition of Strepto-15 mycetes" alapján, a Shirling és Gottlieb [„Methods for Characterization of Streptomyces Species", International Bulletin of Systematic Bacteriology, 16, 313—340 (1966)] által megadott eljárások szerint, más kiegészítő vizsgálatokkal együtt végeztük. 20 Az ICP jellel megadott sorszámok Shirling és Gottlieb által megadott táptalajokat jelentenek. A többi használt táptalajt Waksman írta le. A színeket Kelly és Judd „The ISCC—NBS Method of Designating Colors and a Dictionary of Color 25 Names", US Department of Commerce Circular 533, 1955. alapján adjuk meg. A kerek zárójelek között megadott jelek Tresner és Backus színskálája szerinti színárnyalatokat jelölnek [System of Color Wheels for Streptomyces Taxonomy, Appl. Mic-30 robiol., 11, 335 (1963)]. A színek jeleit aláhúzzuk, a Maerz és Paul (Dictionary of Color, McGraw-Hill, N. Y. 1950) által megadott színárnyalatokat szögletes zárójelekben soroljuk fel. A Streptomyces NRRL 5449 törzs spóratartói 35 egyenesek-hullámosak, spórái ovális-enyhén hengeres alakúak, méretük 1,165 ,14X0,57 fi, 10-50-esével láncokban állnak. A spórák felszíne az elektromikroszkópos képben simának látszik. A légmicélium általában fehér. 26 °C hőmérsékleten csak ve-40 getatív növekedés figyelhető meg, 45 °C hőmérsékleten nincs növekedés. A növekedés és a spórázás szempontjából a 30 °C és 37 °C közötti hőmérséklet számít optimálisnak. Az általánosan elfogadott gyakorlatnak megfele-45 lően az NRRL 5449 jelű mikroorganizmus növekedését az Actinomyceták tanulmányozására használt különböző táptalajokon vizsgáltuk. A tenyésztést minden esetben azonos körülmények között folytatjuk. A használt táptalajokat és a megfigyelt 50 jellemző tulajdonságokat az alábbiakban adjuk meg. ICP 1 táptalaj: jó növekedés; a hátoldal színe halványsárga (HCl); légmicélium és spórák nem fejlődnek; oldódó színanyag nincs. 55 ICP 2 táptalaj: igen jó növekedés; a hátoldal világossárga színű (10J3); igen jól fejlett légmicélium és spórák; (W) fehér a; oldódó színanyagnem figyelhető meg. ICP 3 táptalaj: jó növekedés; a hátoldal sárga-60 zöld (10C1); jól fejlett légmicéliumok és spórák; (W) fehér a; oldódó színanyag nem figyelhető meg. ICP 4 táptalaj: jó-igen jó növekedés; a hátoldal színe középsárga (10H4); jói-igen jól fejlett légmicélium és spórák; (W) fehér a; barna színű oldódó 65 színanyag. 2