167276. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-27106 jelű metabolit előállítására

5 167276 6 ICP 5 táptalaj: igen jó növekedés; a hátoldal középnarancssárga (1016); igen jól fejlett légmicélium és spórák; (Y) halványsárga 2 db; igen halvány, barna színű oldódó színanyag. ICP 7 táptalaj: jó növekedés; a hátoldal halványsárga-zöld színű (10B1); jól fejlett légmicélium és spórák; (W) fehér a; oldódó színanyag nem figyelhető meg. Glicerin-glicin agar: igen jó növekedés; a hátoldal középbarna színű (11J4); igen bőséges spórázás és igen jól fejlett légmicélium; (W) fehér a és (Y) halványsárga 2 db; enyhe, világosbarna színű oldódó színanyag keletkezik. Emerson-agar: igen jó növekedés, a hátoldal szürkéssárga (12H3) színű; légmicélium és spórák nem fejlődnek; oldódó színanyag nincs. Benett-agar: jó növekedés; világossárga színű hátoldal (11J2); gyengén fejlett légmicélium és gyenge spórázás; (W) fehér a; oldódó színanyag nincs. Czapek-agar: igen jó növekedés; középnarancssárga (11J7); igen jól fejlett légmicélium és spórázás; (W) fehér a; oldódó színanyag nincs. Glükóz-aszparagin-agar: rendes-jó növekedés; a hátoldal színe halvány sárga-zöld (10B1); légmicélium és spórák nem fejlődnek; oldódó színanyag nem látszik. Kalcium-malát-agar: igen jó növekedés; a hátoldal szürkéssárga színű (11E4); igen jól fejlett légmicélium és spórák; (Y) halványsárga 2 ba; enyhén barnás színű oldódó színanyag látszik. Táp-agar: jó növekedés; a hátoldal halványsárgazöldszínű (10C1); légmicélium vagy spórák nem fejlődnek; oldódó színanyag nincs. A találmány szerinti eljárásban használt mikroorganizmust általánosan használt módszereket követve megvizsgáltuk a különböző élettani tulajdonságok meghatározására. A megfigyelt és jellemző tulajdonságok a következők: igen gyenge vagy -) kérdéses hasznosítás nincs növekedés, nincs hasznosítás — nincs növekedés. Megfigyelt tulajdonság Hatás a fölözött tejre Nitrát-redukció Melamin-termelés Tripton-élesztőkivonat folyékony táptalajon tirozin agáron Zselatin-elfolyósítás Hőmérséklet-igény Jellemzés kitisztul; 14 nap múlva túrósodás pozitív enyhe nincs 21 napig nem figyelhető meg 26 °C — csak vegetatív növekedés ; 30—37 °C — jó vegetatív növekedés; jól fejlett légmicélium és spórázás; 43—55 °C — nincs növekedés. Az NRRL 5449 jelű mikroorganizmus szénforráshasznosítási-spektrumát az alábbiakban adjuk meg. A növekedés mértékét a következőképpen jelöljük: + hasznosítás- jó növekedés, (+) valószínű hasznosítás — gyenge-közepes növekedés, 5 Szénforrás Raffínóz D-fruktóz Cellobióz L-erabinóz 10 D-mannit Ramnóz Cellulóz Dextróz D-xilóz 15 Inozit Szénhidrát nélkül A hasznosítás mértéke + ( + ) ( + ) (+) ( + ) ( + ) ( + ) + (-)-( + ) A Streptomyces candidus NRRL 5449 tenyésztésére igen sokféle táptalajt használhatunk. A gaz-20 daságos termelés, a legjobb kitermelés és a termék könnyű elkülönítése érdekében azonban előnyösen bizonyos adott összetételű táptalajokat Használunk. így például nagyobb térfogatban kivitelezett Tcrmentációkor szénforrásként például glükózt, fruk-25 tózt, maltózt, keményítőt, inozitot stb., előnyösen invert cukrot vagy kukoricaszirupot adagolunk a táptalajba. Ha a monensint a Streptomyces candidus NRRL 5449 törzs tenyészlevében A 27106 metabolittá alakítjuk át, úgy a táptalajba az át-30 alakítás hatékonnyá tételére glükózt adunk. Abban az esetben, ha a Streptomyces candidus NRRL 5449 törzset azon enzimrendszer előállítására tenyésztjük, amellyel a monensint A 27106 metabolittá alakítjuk, úgy a fermentációs táptalajba nem 35 kell glükózt adagolnunk. Nitrogénforrásként előnyösen peptonokat, szójalisztet, aminosavakat stb. használunk. Szervetlen sóként többek között olyan általánosan használt, vízben oldódó sókat adunk a táptalajba, amelyek 40 vas-, nátrium-, kálium-, ammónium-, kalcium-, foszfát-, klorid-, karbonátionokra disszociálnak. Az organizmus növekedéséhez és fejlődéséhez elengedhetetlenül szükséges esszenciális nyomelemeket szintén hozzáadjuk a táptalajhoz. Ezek 45 az elemek szennyezőanyagként általában olyan mennyiségben vannak jelen a táptalaj többi összetevőjében, amely elegendő a mikroorganizmus növekedésének biztosításához. A táptalaj kezdeti pH-ja változhat. Előnyösen 50 azonban a táptalaj pH-ját oltás előtt, a táptalajtól függően, 5,7 és 7,5 közé állítjuk be. Mint ahogy az más Actinomyceták esetében is megfigyelhető, a fermentáció során a táptalaj pH-ja fokozatosan a lúgos tartomány felé tolódik el, és 55 5,9-es kezdeti pH-értékről a mikroorganizmus növekedése alatt 6,9-re vagy magasabbra emelkedhet. A táptalaj leállási pH-értéke legalább részben a táptalaj kezdeti pH-jától, a táptalajban jelenlevő pufferektől és a mikroorganizmus növekedésének 60 idejétől függ. Bár a táptalaj pH-ja sav vagy bázis adagolásával beállítható, kedvező eredményeket abban az esetben kapunk, ha ezt nem tesszük. Mint ahogy más Streptomyces fajok is, az NRRL 5449 törzs levegőztetett fermentációs körülménye-65 ket igényel. Kis térfogatban a szokásos módon, 3