167271. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aminocsoporton alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavak és peptidek előállítására

167271 15 16 alakítjuk. Eljárhatunk úgy is, hogy először az aminosav karbonsav-funkcióját alakítjuk át aktív észterré, vegyes anhidriddé vagy acil-halogeniddé és ezután védjük meg az aminocsoportot úgy, hogy II általános képletű acetilén-kötést tartalmazó halogénformiáttal vagy szénsavészterrel reagáltatjuk. A karbonsav-csoport ilyen származékokká történő átalakítását a szakember számára ismert módokon valósíthatjuk meg. Sok esetben a találmány szerinti eljárással előállított N-védett aminosav kapcsolható és így peptidet kapunk, anélkül, hogy a karbonsav funkcionális csoportot származékká alakítanánk, ekkor a kapcsolási reakciót kondenzálószer segítségével, így diciklohexil-karbodiimiddel végezzük. Az így kapott N-védett aminosavat, aktív észtert, vegyes anhidridet vagy-acil-halogenidet ezután másik aminosavval vagy aminopeptiddel reagáltatjuk, így a kívánt III általános képletű peptidet kapjuk, ahol a terminális amino-csoport alkiniloxi-karbonilcsoporttal van védve. Az aminosavban vagy peptidben adott esetben jelenlevő egyéb reakcióképes csoportokat kívánt esetben megvédhetjük a peptidszintézisben általánosan alkalmazott védőcsoportokkal. Az így kapott di- vagy polipeptid N-terminális alkiniloxi-karbonil védőcsoportját ezután szelektíven eltávolíthatjuk katalitikus hidrogenolízissel 5%-os, szénre felvitt palládium segítségével a fentiekben ismertetett módon. Az így kapott peptidet általánosan ismert módon különíthetjük el és tisztíthatjuk, például extrakcióval, átkristályosítással vagy adszorpcióval, így oszlopkromatográfiával vagy preparatív vékonyr étegkromatográfiával. Az így elkülönített, szabad N-terminális aminocsoportot tartalmazó dipeptidet vagy polipeptidet ezután egyéb, találmány szerinti alkiniloxi-karbonilvédőcsoporttal védett aminosavval reagáltathatjuk, így olyan tripeptidet vagy polipeptidet kapunk, amely az utóbbi aminosavat a peptidláncban tartalmazza. Ezután az N-terminális védőcsoportot katalitikus hidrogenolízissel távolítjuk el a fentiekben ismertetett módon, így szabad N-terminális aminocsoportot tartalmazó tripeptidet vagy polipeptidet kapunk. így a találmány szerinti módszer, amely magában foglalja az I általános képletű N-védett aminosav és egy másik aminosav vagy peptid kapcsolását és az acetilén-kötést tartalmazó védőcsoport katalitikus hidrogenolízisét a kapcsolt termékből, bármilyen kívánt lánchosszúságú és kívánt aminosavat tartalmazó peptid szintézisére alkalmas. A fentiekben ismertetett peptidszintézis különösen értékes módszer az alkiniloxi-karbonil-védőcsoport előnyeinek következtében. Amint a fentiekben már említettük, ez a védőcsoport semleges pH-értéken könnyen eltávolítható katalitikus hidrogenelizissel. Ennek következtében a kialakított peptid egyéb, savas vagy bázikus közegben eltávolítható védőcsoportjai sértetlenek maradnak, amikor az acetilén-kötést tartalmazó védőcsoportot eltávolítjuk. Ugyanígy az N-védőcsoport könnyen eltávolítható kéntartalmú funkcionális csoportok jelenlétében is. Minthogy az alkiniloxi-karbonil-védőcsoport katalitikus hidrogenolízissel szelektíven eltávolítható, a katalitikus hidrogenolízissel önmagukban szintén eltávolítható egyéb védőcsoportok jelenlétében is 5 elvégezhető a hasítás. Ilyen egyéb általánosan alkalmazott védőcsoport a benzil- és benziloxikarbonilcsoport (karbobenzoxicsoport). így például ha N-karbobenzoxil-L-metionil-glicin-etilésztert vetettek alá hidrogenolízisnek (1,1 g vegyület 25 ml, 3 ml 1 n 10 HCl-t tartalmazó metanolban 0,3 g 5%-os Pd-C jelenlétében), 4 óra múlva a kiindulási anyag változatlan maradt. Ha ugyanilyen körülmények között az N-(3-metil-l-butih-3-oxikarbonil)-L-metionilglicin-etilésztert vetjük alá hidrogenolízisnek, kö-15 rülbelül 80%-os kitermeléssel kapunk L-metionil-glicin-etilésztert. A találmány szerinti alkiniloxi-karbonil-védő -csoportot a III általános képletű peptidből savas 20 hidrolízissel is eltávolíthatjuk. A savas hasítást oly módon valósíthatjuk meg, hogy az N-védett peptidet trifluorecetsavval vagy sósav jégecettel készített 1 n oldatával reagáltatjuk. így ha a találmány szerinti eljárás kívánt végterméke III általá-25 nos képletű N-védett peptid, az egyéb, savas közegben eltávolítható védőcsoportokat az alkiniloxikarbonil-csoport savas eltávolításával együtt távolíthatjuk el. Ilyen általánosan alkalmazott védőcsoportok a terc-butiloxikarbonilcsoport, 0-terc-30 -butilcsoport és terc-butilésztercsoport, ezeket az alkiniloxi-karbonil-csoport savas hasításával egyidejűleg távolíthatjuk el. Ha azonban a III általános képletű vegyület 35 nagyobb molekulasúlyú peptidek szintézisének közbenső terméke, az alkiniloxi-karbonil-csoportot szelektíven eltávolíthatjuk a fentiekben ismertetett módon katalitikus hidrogenolízissel, ekkor a savas közegben eltávolítható védőcsoportok, így a terc-40 butiléter és észter és a t-BOC védett aminocsoportok sértetlenek maradnak az ezt követő kapcsolási reakciókra. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott elő-45 nyös védőcsoport a CH3

O I II H—C = C—C—O—C— 50 | CH3 képletű 3-metil-l-butin-3-oxikarbonil védőcsoport. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az 55 oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi kiviteli -példákat adjuk meg. 1. példa 60 L-aszparagil-L-fenilalanin-amidot (amelyet Morely módszerével állítottunk elő, J. Chem. Soc. 1966, 555) N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-metionin-2,4,5-triklórfenilészterrel reagáltatunk dimetilfor-65 mamidban O °C-on trietilamin jelenlétében, így 8