167271. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aminocsoporton alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavak és peptidek előállítására
167271 33 34 zise (-Phe-L-Val-GIn-L-Trp-L-Leu-L-Met-L-Asp-L-Thr-di-O-terc-butil-L-Thr): Asp(l,13) Thr (1,08), Glu (1,0), Val (0,98), Met (1,13), Leu (1,05), Phe (1,16) Elemzési eredmények a CS7 H 87 N 1:l 0 12 S képlet alaqján: számított: C%59,51, H% 7,62, N% 13,39, 0% 16,69, 2,79; talált: C% 59,62, H% 7,85, N% 13,15, 0% 61,70, S% 3,00. 40. példa A glükagon 27—29 fragment jenek előállítása a következő módon történhet: A. módszer N-(3-Metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-metionil-L-aszparaginil-L-treanin-di-O-terc-butil-észter 8,8 g (0,02 mól) N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-metionin-diciklohexilamint 50 ml etilacetátban szuszpendálunk és a szuszpenziót egyszer 40 ml 10%-os citromsav-oldattal, kétszer 40 ml 10%-os nátriumklorid-oldattal kirázzuk, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az etilacetátot vákuumban lepároljuk és a visszamaradó olajszerű anyagot 40 ml tetrahidrofuránban feloldjuk. 6,90 g (0,02 mól) L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butil-észtert, majd 4,99 g (0,022 mól) N-etoxikarbonil-2--etoxi-l,2-dihidrokinolint [ EEDQ) adunk hozzá és a reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot vákuumban olajszerű anyaggá bepároljuk, majd az olaj szerű-anyagot 50 ml etilacetátban feloldjuk, az oldatot háromszor 50 ml 10%-os citromsav-oldattal és 10%-os nátriumklorid-oldattal mossuk, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az etilacetátot vákuumban lepároljuk, így fehér habszerű anyagot kapunk. Ezt kismennyiségű éterben feloldjuk és elegendő ciklohexánt adunk hozzá, hogy a terméket finom por alakjában lecsapjuk. A csapadékot szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A keletkező amorf terméket összegyűjtjük (8,3 g, 71%). Vékonyrétegkromatogram: 1 folt (ninhidrin és klórtoluidin), Rf-érték: 0,76 (butanol :ecetsav :víz 100:10:30). Elemzési eredmények a C27 H 46 N 4 O g S képlet alapján: számított: C% 55,27, H%7,91, N% 9,55, 0% 21,81, S% 5,46; talált: C% 55,31, H% 8,19, N% 9,36, 0% 21,89, S% 5,73. L-Metionil-L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butil-észter 1,174 g (2 mmól) N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-metionil-L-aszparaginil-L-treanin-di-0--terc-butil-észtert feloldunk 50 ml metanolban. Kis mennyiségű, vízzel megnedvesített szénre felvitt 5%-os palládiumot adunk az oldathoz és rázás közben 2,75 órán keresztül hidrogéngázt bocsátunk át rajta. Ezután a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet vákumban olajszerű anyaggá bepároljuk. Az olajszerű anyagot egymást követően pentánnal és éterrel eldörzsöljük. Az oldószereket vákumban lepároljuk, igy fehér színű habszerű anyagot kapunk (0,585 g, 61,4%). Vékonyrétegkromatogram: 1 folt (ninhidrin ós klórtoluidin), Rí-érték: 0,56 (2-butanol—3%-os ammóniaoldat 3:1). 5 Elemzési eredmények a C21 H 40 N 4 O 6 S képlet alapján: számított: C% 52,92, H% 8,46, N% 11,75, S% 6,73; talált: 10 C% 52,49, H% 8,55, N% 10,19, S% 6,34. A triturátumokat betöményítve további 0,192 g (10%) terméket kapunk, amelyet kis mennyiségű, vékonyrétegkromatográfiásan meghatározható kiindulási anyag szennyez. 15 B. módszer N-(3-Metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-metionil-L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butilészter 4,41 g (10 mmól) N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-metionin-diciklohexilaminsót 75 ml etilace-20 tatban szuszpendálunk, kétszer 20 ml 10%-os citromsav-oldattal, majd kétszer 20 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. A szárított oldatot bepároljuk. Az olajszerű maradékot 20 ml dimetilformamidban feloldjuk és az ol-25 datot —15 °C-ra hűtjük. Az oldathoz hozzáadunk 1,1 ml (10 mmól) N-metilmorfolint és 1,23 ml (9-5 mmól) izobutil-klórformiátot. Az elegyet 15 percen keresztül —15 °C-on keverjük majd 2,59 g (7,5 mmól) L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butil-30 észter 90 ml dimetilformamiddal készített és —15 °C-ra hűtött oldatával kezeljük. Az elegyet 15 órán keresztül —15 °C-on keverjük, majd 0,21 g nátriumhidrogénkarbonát 20 ml vízzel készített hideg oldatával kezeljük és 30 percen át —15 °C-on keverjük. 35 Az oldatot élénk keverés közben beleöntjük 800 ml telített nátriumklorid-oldatba. A gumiszerű terméket összegyűjtjük, etilacetátban feloldjuk, vízzel mossuk és vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. A szárított oldatot vákuumban bepároljuk, így 40 tiszta olajszerű anyagot kapunk, amelyet éter és petroléter (30:60) elegyéből kristályosítunk. A kristályos terméket szűrjük és vákuumban káliumhidroxid felett szárítjuk. így 2,58 g (58,7%) terméket kapunk. Vékonyrétegkromatogram: 1 folt 45 (klórtoluidin), Rf-érték: 0,66 (2-butanol—3%-os ammóniumhidroxid 3:1), MMR-spektrum (DMSO): 1,05 [d,3,J = 6H2 , ßCR3{Thi)], 1,14 (S,9-terc-0--butil-éter), 1,41 (S, O-t-butilészter), 1,61 [S,6 = = C— C(CH3) 2 ] 2,04 [S,3,SCH 3 (Met)], 3,37 (S,l,-50 H—C C), 4,08 [M,3, ß—CH(Thr), a—CH (Thr), a—CH(Met), 4,71 [M,l,5 6 és 8H2, a—CH Asn], 6,94 és 7,37 [S,l—CONH2 (Asn)], 7,25 [d,l,J= I I = 8H2 , NH (Met)], 7,52 [d,l,J = 8, NH (Asn)], 8,25 55 | | | [d,l,J=8, NH (Thr)]. I Elemzési eredmények a C27H 46 N 4 0 8 S képlet alapján: 60 számított: C% 55,27, H% 7,91, • N% 9,55, 0% 21,81, S% 5,46; talált: C% 55,33, H% 8,15, N% 9,27, 0% 22,01. 65 S% 5,24. 17
