167271. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aminocsoporton alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavak és peptidek előállítására
167271 35 36 41. példa N- (1 -Etinil-1 - ciklohexil-oxikarbonil) -L-metionil-L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butil-észtert állítunk elő a 40. példa szerinti B. eljárással oly módon, hogy N-(l-etinil-l-ciklohexil-oxikarbonil)-L-metionint (diciklohexilaminsóból izolálva) reagáltatunk L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butilészterrel. Elemzési eredmények a CgoH^^OgS képlet alapján: számított: C% 57,48, H%8,04, N% 8,94, 0% 20,42, S%5,11; talált: C% 57,20, H% 7,84, N% 8,74, 0% 20,67, S% 5,35. 42. példa N-(l-Fenil-3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-metionil-L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butil-észtert állítunk elő a 40. példa szerinti A. módszerrel oly módon, hogy l-fenü-3-metil-l-butin-3-oxikarbonil-L-metionint (diciklohexilaminsójábol izolálva) L-aszparaginil-L-treonin-di-0-terc-butü-észterrel. Olvadáspont: 72,5—75 °C. Elemzési eredmények a C33 H 50 N 4 O 8 S képlet alapján: számított: C% 59,80, H% 7,60, N% 8,45, S% 4,84; talált: C% 59,55, H% 7,81, N% 8,36, S% 4,89. A fenti 41. és 42. példa védett tripeptidjeinek hidrogenolízisével az A. módszer szerint a glükagon 27—29 fragmentjét kapjuk, az L-metionil-L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butil-észtert. 43. példa N-(3-Metil-l-butin-3-oxikarbonil)-0-terc-butil-L-szeril-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-glutaminil-L-terc-butil-L-aszparogil-L-fenilalanil-L-valil-L-glutaminil-L-triptofil-L-leucil-L-metionil-L-aszparaginil-treonin-di-O-terc-butil-észter-dihidroklorid 1,438 g (1,25 mmól) L-fenilalanil-L-valil-L-gultaminil-L-triptofil-L-leucil-L-metionil-L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butilészter 15 ml dimetilformamiddal készített és —15 °C hőmérsékleten tartott oldatához hozzáadjuk 1,921 g (1,87 mmól) N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-0-terc-butil-L-szeril-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-glutaminil-O-terc-butil-L-aszparaginsav-dihidroklorid 8 ml dimetilformamiddal készített oldatát. A kevert reakoióelegyhez 0,431 g (3,74 mmól) N-hidroxi-szukcinimidet, 0,258 g (1,25 mmól) diciklohexil-karbodiimidet és 7 ml dimetilformamidot adunk. A reakcióelegyet 3 órán keresztül —15 °C-on, 90 órán keresztül 4 °C-on, majd 24 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet szűrjük és a szűrletet etilacetáttal felhígítjuk, ekkor csapadék válik le. A csapadékot szűrjük és metanol—etilacetát-elegyből háromszor kristályosítjuk. így 0,611 g (22%) N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-O-terc-butü-L-Ser-L-Arg-L-Arg-L-Ala-L-Glu-0--terc-butil-L-Asp-L-Phe-L-Val-L-Glu-L-Trp-L-Leu-L-Met-L-Asn-L-Thr-di-O-terc-butil-észter 2HCl-t kapunk. 5 A reakciótermék savas hidrolizátumának kvantitatív aminosav analízise az alábbi eredményeket adta: Thr(0,98), Asp(2,2), Met(0,95), Lev(l,0), Glu(2,2), Val(0,98), Phe(0,93), Ala(l,2), Arg(2,2), Ser(l,00). 10 44. példa N-(l-Klór-3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-metionil-L-aszparaginil-L-treonin-di-O-terc-butilész-15 ter 1,8 g (4 mmól) N-(l-klór-3-metil-l-butin-3-oxikarbonü)-L-metionin-diciklohexilaminsó 10 ml etilacetáttal készített szuszpenzióját kétszer 10 ml 10%-os citromsav-oldattal és egyszer 10%-os nát-20 riumklorid-oldattal kirázzuk. A kapott oldatot nátriumszulfát felett szárítjuk és a megszárított oldatot vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajszerű anyagot 10 ml tetrahidrofuránban feloldjuk és az oldathoz hozzáadunk 1,38 g (4 mmól) L-aszpara-25 ginü-L-treonin-di-0-terc-butil-észter és 0,998 g (4,4 mmól) N-etoxi-3-etoxi-l,2-dihidrokinolint. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd vákuumban szárazra pároljuk. A keletkező habszerű anyagot 20 ml etilacetátban feloldjuk és az oldatot 30 háromszor 20 ml 10%-os citromsav-oldattal és egyszer 10%-os nátriumklorid-oldattal mossuk. A megmosott oldatot szárítjuk és bepároljuk, így 1,09 g (44%) N-védett tripeptidet kapunk. Elemzési eredmények a C27 H 46 0 8 SC1 képlet alap-35 ján: számított: C% 52,12, H% 7,45, N% 9,00, 0% 20,57, S%5,15, Cl%5,70; talált: 40 C% 52,24, H%7,39, N% 8,75, 0% 20,42, S% 4,90, Cl% 5,68. 45. példa 45 N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-fenilalanin-diciklohexilaminsót a következőképpen állítunk elő: 4,66 g (44 mól) nátriumkarbonát 40 ml vizes oldatához 3,14 g (19,0 mmól) L-fenilalanint adunk és 50 a kapott oldatot 5 °C-ra hűtjük. Az oldathoz 3 g (20,4 mmól) 3-metil-l-butin-3-oxikarbonil-kloridot adunk, és az oldatot 0 és 5 °C közötti hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A keletkezett oldatot ezután kétszer 100—100 ml éterrel extraháljuk és a vizes 55 fázist tömény sósav lassú, keverés közben történő hozzáadásával pH 1 és 2 érték közé savanyítjuk. A keletkezett olajos terméket háromszor 100—100 ml etilacetáttal extraháljuk és az extraktumot 100 ml 10%-os nátriumklorid-oldattal mossuk, 60 majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az etilacetátos extraktumot bepároljuk, a kapott olajat éterben oldjuk és 3,44 g (19,0 mmól) diciklohexilaminnal kezeljük. Ily módon az aminsót csapjuk ki. A terméket elválasztjuk, petroléterrel mossuk és 65 levegőn történő szárítás után 6,11 g (70,5%') ter-18
