167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására

Í6723Ö 69 70 egyesítjük és dímetilformamid-éter (1:1) elegyből átkristályosítjuk. Op.: 237—241° (bomlás közben). [O]D = +8° (c = 1,0, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rf52

= 0,59,

Rf102

E

= 0,59, alumíniumoxidon (Alox-on) Rf43

A

= 0,59. 4. H-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe 6,31 g Z-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe vegyületet 600 ml metanolban 700 mg 10%-os palládium-szén-katalizátorral szobahőmérsékleten rázókacsában semlegesen hidrogénezünk. Az anyag lassan oldatba megy. Az amorf bepárlási maradékot közvetlenül használjuk fel a következő kondenzációs lépésben. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás eljárás során Rf42

=

0,21, Rf102

A

= 0,21, alumíniumoxidon Rf43

A

= 0,19. 5. Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe 5,9 g Z-Tyr(tBu)-OH (8,8 g Z-Tyr(tBu)-OH-diciklohexilammóniumsóból felszabadítva) 85 ml tetrahidrofurános oldatához 1,84 ml N-metilmorfolint adunk és —33°-on 2,28 ml klórhangyasav-izobutilészterrel reagáltatjuk. Félóráig —20 és —12 közötti hőmérsékleten keverjük, majd H-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe 25 ml dimetilformamidos, —10°ra hűtött oldatát adjuk hozzá, majd 15 ml dimetilformamiddal bemossuk. 19 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk, etilacetátban szuszpendáljuk és háromszor 5%-os citromsavoldattal, háromszor 2 n nátriumkarbonátoldattal és ötször félig telített nátriumkloridoldattal kirázzuk. A szuszpendált maradékot leszűrjük és nagy vákuumban szárítjuk. A termék metanolból kikristályosítható. Op.: 216—219°. [a]TM = +i (c = 1,0, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rf52

= 0,64,

Rf102

A

= 0,70, alumíniumoxidon (Alox-on) Rf53

A

= 0,65, Rf89

= 0,17. 6. H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe 5,1 g Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe vegyületet 600 ml metanolban szobahőmérsékleten 800 mg 10%-os palládium-szén-katalizátorral dekarbobenzoxilezünk. A keletkezett H-Tyr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe szilikagéles vékonyrétegkromatogramon a következő Rfértékeket adja: Rft9

= 0,15,

Rf102

E

= 0,28, Rf

kloroform-metanol (9:1) rendszerben = 0,11. 7. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe A 6. pontban előállított H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe pentapeptilformamidban oldunk, és 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A feldolgozás úgy történik, mint az 5. pontban. Az etilacetátban nehezen oldódó maradékot metanolból átkristályosítjuk. Op.: 206—208°; [<Z]D = = +15° (c = 1,7, dimetilformamidban). Szilikagéles vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rfi02E = 0)69. Rf89 0;28, Rf

kloroform-metanol (9:1) rendszerben = 0,30. 8. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-NH-NH2 2,0 g Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-OMe vegyületet 150 ml metanolban oldunk és 5 10,7 ml hidrazinhidráttal szobahőmérsékleten 6 óráig reagáltatjuk. Ezután a csapadékot leszűrjük, metanollal mossuk és nagy vákuumban tömény kénsav felett szárítjuk. Op.: 231° (bomlás közben). [a] D = +4° (c = 0,89, dimetilformamidban). 10 Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatografias vizsgálat során Rf43

.g

= 0,57, Rf45

=

0,60, Rf102

E

= = 0,58. 9. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-15 -Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH 800 mg Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-NH-NH2

vegyületet

18 ml dimetilformamidban oldunk, 20°-on 0,58 ml 3 n dioxános sósavoldatot 20 adunk hozzá, és 0,16 ml terc-butilnitrittel keverjük. 15 percig —20 és —15° közötti hőmérsékleten keverjük, majd 0,30 ml N,N-diizopropil-etilamint és 855 mg H-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH-acetát (2. példa 36. 25 pont) 20 ml 90%-os dimetilformamidos oldatát adjuk hozzá és 0°-on keverjük. Kétszer egy-egy óra múlva 0,075 ml N,N-diizopropil-etilamint (összesen 0,15 ml-t) adunk hozzá és 15 órán át 0°-on keverjük. Ezután 600 ml éterrel elkeverjük, a csapadékot 30 hagyjuk kiválni és leszívatjuk. Tisztítás céljából a nyers terméket egyszer dimetilformamid-etilacetát elegyből és egyszer dimetilformamid-0,002 n vizes sósavoldat elegyből kicsapjuk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatografias 35 eljárás során Rf^s = 0,62, Rf100

= 0,32, Rf

45

= = 0,53, Rf3

= 0,27. 10. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-40 -Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH

2 786 mg Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH vegyületet, 251 mg H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 vegyületet

(2. példa 42. 45 pont) és 82 mg N-hidroxiszukcinimidet 10 ml dimetilformamidban szuszpendálunk és 40°-on keverve 90 mg diciklohexilkarbodiimid 1 ml dimetilformamidos oldatát adjuk hozzá. 3 óráig 40°-on tartjuk, majd további 65 mg diciklohexilkarbodiimidet 50 adunk hozzá és összesen 21 órán át 40°-on keverjük. 10 ml metanollal hígítjuk és 350 ml éterben elkeverjük, a csapadékot kiülepítjük és leszűrjük. A csapadékot Craig-extraktonon metanol-puffer-kloroform-széntetraklorid (10:3:5:6, puffer az 1. példa 18. 55 pontjában leírt) rendszerrel tisztítjuk. 450 lépcső után a vékonyrétegkromatográfiásan egységes anyagot izoláljuk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatografias vizsgálat során Rf3

= 0,40, Rf

45

= 0,42, Rf

100

= 60 = 0,32. 11. H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 65 64 mg Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn-35