167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására

167238 61 62 morfolinnal keverjük. —22°-on 0,170 ml klórhangyasav-izobutilésztert adunk hozzá és félóráig —22 és —10° közötti hőmérsékleten keverjük. Ezután a fentiekben leírt H-Thr(tBu)-Gln-Asp (OtBu)-Phe-OMe vegyületet 15 ml tetrahidrofuránban oldjuk és előre lehűtve az előző oldathoz csepegtetjük, majd 5 ml ugyanilyen oldószerrel bemossuk. Félóráig —10°-on,. majd még 15 óráig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután vákuumban bepároljuk és etilacetátos oldaton a 17. pontban leírt módon feldolgozzuk. A nyersterméket 15 ml etilacetátban oldjuk, 40 ml éterrel kicsapjuk, majd hűtőszekrényben metanolból kikristályosítjuk. Az anyag rövid, vastag tűs kristályokat alkot, amelyek nagy vákuumban szárítva 50°-on elmállanak. Op.: 169— 173°. Szilikagéles vékonyrétegkromatogramban az Rf értékek: kloroform-metanol (9:1) rendszerben = 0,46; kloroform-aceton (1:1) rendszerben = 0,44; Rf89

= 0,61; Rf (aceton) = 0,68; Rfio2E = 0,73. [a]£ = —54°±0,5° (c = 2,0, dimetilformamidban). 20. H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 2,36 g Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe--OMe vegyületet 450 ml metanolban 500 mg 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében szobahőmérsékleten hidrogénezünk. így színtelen habot kapunk, amely a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint egységes és így mint ilyen tovább használható. Szilikagéles vékonyrétegkromatogramban a következő Rf értékeket adja: kloroform-metanol (95:5) rendszerben Rf = 0,22; Rf89

= 0,42. 21. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe A 20. pont termékét és 1,48 g Z-Thr(tBu)-OSU vegyületet 3 ml dimetilformamidban oldunk és 21 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet sok etilacetáttal hígítjuk és a szokásos módon (1. a 17. pontot) dolgozzuk fel. A nyers terméket 30 ml etilacetát-metanol (9:1) elegyben melegen oldjuk és jégfürdőn történő hűtés közben 80 ml éterrel kicsapjuk. így a terméket színtelen amorf por alakban kapjuk. Op.: 146—148°. Szilikagéles vókonyrétegkromatogramon a következő Rf-értékek adódnak: kloroform-metanol (9:1) rendszerben Rf = 0,55; kloroform-aceton (1:1) rendszerben Rf = 0,60; Rf89

= 0,43. [a]% = + 6°±0,5° (c = 2,0, dimetilformamidban). 22. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp (OtBu)-Phe-NH-NH8 1,91 g Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp (OtBu)-Phe-OMe Vegyületet 80 ml metanolban oldunk és 80 ml hidrazinhidrátot keverünk hozzá. 22 órás, szobahőmérsékleten történő állás után a kivált terméket elválasztjuk és nagy vákuumban 60°-on szárítjuk. így a mikrokristályos hidrazidot kapjuk. Op.: 226—229° (bomlás közben). Szilikagéles vékonyrétegen végzett vizsgálatok során az anyag a következő Rf-órtékeket mutatta: kloroform-metanol (9:1) rendszerben Rf=0,42; ciklohexán-aceton (3:7) rendszerben Rf=0,23; 5 Rf86

= 0,34. [a]% = +4°±1° (c = 1,0, dimetilformamidban). 23. Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-Mis-OMe 5,4 g H-Lys(BOC)-Phe-His-OMe (lásd az 1. példa 10 32. pontját) és 4,5 g Z-Asn-ONP vegyületet 20 ml dimetilformamidban 20 órán át szobahőmérsékleten keverünk. Etilacetát hozzáadásával kicsapjuk a peptidszármazékot, majd leszűrjük és éterrel mossuk. Metanolból átkristályosítva a termék 182—183°-on 15 olvad. Vékonyrétegkromatogramban Rf100

= 0,57 (szilikagéles lemezen), [a]TM = —28° (c = 1,0, dimetilformamidban) . 24. Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-NH-NH2 20 3,97 g Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-OMe vegyületet 8 ml meleg dimetilformamidban és 12 ml metanolban oldunk. A kb. 30°-os oldathoz 2,5 ml hidrazinhidrátot adunk és 20 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Víz hozzáadásakor a peptidhidrazid 25 kicsapódik, ezt leszűrjük és vízzel hidrazinmentesre mossuk. A terméket etanolból átkristályosítjuk. Op.: 200—201°. Szilikagéles vékonyrétegkromatogramon Rf43

<7 = 0,5. 30 25. H-Phe-Pro-OH-monohidrát Z-Phe-Pro-OH vegyületet metanol-víz (4:1) elegyben katalitikus reakcióval (palládium-szén) a szabad dipeptiddé alakítunk át. Ezt a katalizátortól megszűrt hidrogénezett ólat kis térfogatra való 35 bepárlása után acetonból kikristályosítva kapjuk, mégpedig 125—128° olvadáspontú dipeptid-monohidrátként. 26. Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-OH 40 20,2 g Z-Thr(tBu)-OSU, 13,3 g H-Phe-Pro-OH-monohidrát vegyületeket és 6,54 ml trietilamint 80 ml dimetilformamidban oldunk, egy éjszakán át kb. 20°-on állni hagyjuk és nagy vákuumban raga-45 dós masszává koncentráljuk. Ezt 500 ml etilacetátban oldjuk és ötször 100—100 ml 5%-os borkősavoldattal, majd a semlegességig vízzel mossuk. A szerves fázist szárazra pároljuk, a visszamaradó habot porítjuk és nagy vákuumban 40°-on szárítjuk. 50 Etilacetát-petroléter elegyből kétszer kicsapva 13,3 g amorf, kromatográfiailag tiszta tripeptidszármazékot kapunk, elmosódott, kb. 75—86° olvadásponttal. Szilikagéles lemezeken végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok során R tnf>

— 55 = 0,68, Rfl2lA

= 0,57. 27. Z-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe 1,36 g H-Ala-Ile-Gly-OMe (lásd az 1. példa 39. 60 pontját) vegyületet 3 ml dimetilformamidban 20 órán át szobahőmérsékleten keverünk. A tripeptidszármazékot éterrel kicsapjuk, leszűrjük és éterrel mossuk. Etanolból átkristályosítva az op.: 229— 230°. [a]n = —43° (c = 1,0, metanolban). Rf

= 65 = 0,55 kloroform-metanol (95:5) rendszerben. . 31