166989. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulinsó-protamin komplex vizes szuszpenziójának előállítására

3 166989 4 faktorral (glukagon), a kereskedelmi cink-inzulin kristályok nagymolekulasúlyú, antigén hatású fehérjéi - akadályozza az olyan készítmények kifejlesztését, amelyek egyébként adagolás után azonnal hatnak és hypoglycemias hatásuk hosszú időn át érvényesül. A találmány szerinti eljárás egyik előnye az, hogy az eljárás szerint készült, injekcióval adagolható inzulintartalmú szuszpenzió adagolás után azonnal hat, és hatása hosszú ideig érvényesül. A találmány szerinti eljárás további előnye, hogy az eljárás szerint készült inzulin-komplex vagy szuszpenzió hosszú időn át jelentősebb bomlás nélkül tárolható. Az 1., 2., 3., 4. és 5. ábrán a különböző, injekcióval adagolt inzulinkészítmények az állatok vércukor-szintjére kifejtett hatását ábrázoljuk. Az abszcisszán az időt, a kezelt állatok vércukortartalmát az ordinátán ábrázoljuk. Az 1. ábrán az adagolt protamin-nátrium-inzulin hatását hasonlítjuk össze az izofán-inzulin (NPH) hatásával. A 2. ábrán a találmány szerinti eljárással előalított komplex vagy szuszpenzió hatását az inzulinsav és izofán-inzulin elegyének hatásával hasonlítjuk össze. A 3. ábrán a találmány szerinti eljárással előállított három szuszpenzió, a marhainzulin, a sertésinzulin és a kettő elegyének hatását ábrázoljuk. A 4. ábrán a találmány szerinti eljárással előállított komplex hatását ábrázoljuk különböző idejű tárolás után. Az 5. ábrán a találmány szerinti eljárással előállított különböző komplexek és szuszpenzióknak a vércukorszintre kifejtett hatását ábrázoljuk. A találmány szerinti eljárással előállított inzulinsó-protamin-komplex az adagolás után gyorsan ható és hosszú hatásidejű hypoglycemias készítmények aktív összetevőjeként használható. Az inzulinsó alkálifémsó vagy ammóniumsó formában és a protamin előnyösen mint szulfát, minden 100 egység inzulinra vonatkoztatva 0,2—1,5 mg, előnyösen 0,4—0,8 mg-os mennyiségben van jelen a készítményben. A cinktől vagy más nehézfémektől gyakorlatilag mentes inzulinsót előnyösen az inzulin bázikus oldatából kikristályosítva állítjuk elő, nátriumhidroxiddal vagy ammóniumhidroxiddal. Akikristályosítás után a kristályokat mossuk és addig szárítjuk, míg a termék nedvességtartalma legfeljebb 10%-os lesz. Az inzulinsó semleges pH-értéken vízben azonnal oldódik, és oldatban 3 hónapon át jelentősebb inaktiválódás nélkül tárolható. A találmány szerinti eljárás értelmében -úgy járunk el, hogy a fentiek szerint készült inzulinsót és a protamint vizes oldatban oly módon elegyítjük, hogy az inzulinsó és a protamin komplexe keletkezzen. A vizes oldat pH-ját előnyösen 6,5 és 8,0 közé állítjuk be. A protamin-inzulinsó-komplexet szűréssel vagy más módon könnyen elkülöníthetjük a folyadékfázistól és ezután szárítjuk. A komplex szárítva legalább egy éven át, vagy tovább, aktivitáscsökkenés nélkül tárolható. Ha a protamin-inzulinsó-komplexet használni kívánjuk, a megszárított anyagot vizes, előnyösen izotóniás, 6,5—8,0-as pH-jú oldószerben feloldjuk. Oldás után a komplex injekcióval azonnal adagolható, a kezelt betegen a készítmény hatása igen gyorsan jelerrt-5 kezik és hypoglycemias aktivitása hosszű ideig fennmarad. A protamin-inzulinsó-komplex előáffitasának előnyös megvalósítási változata szerint az inzulin 10 nátriumsóját állítjuk elő oly módon, hogy a só gyakorlatilag cinkmentes, azaz cinktaríalma kisebb mint 0,05%. A nátriumsó kristályos termék, de vízben vagy izotóniás oldószerben oldódik. Anátriumsót olyan mennyiségben oldjuk az oldószerben, 15 hogy az oldat 100ml-e 90-115 egységet tartalmazzon. Ezután az oldathoz előnyös mennyiségű protaminszulfátot adunk. Ekkor azonnal igen finom eloszlású csapadékként oldhatatlan komplex keletkezik. Az igen kicsiny részecskékből álló csa-20 padék jól szuszpendált formában marad, ami alkalmassá teszi azt az injekcióban történő adagolásra. A komplex stabil, ha szuszpenzióként tároljuk és aktivitása legalább egy évig nem változik. 25 Abban az esetben, ha a megszárított protamin-inzulinsó-komplexet ismét szuszpendáljuk, előnyös a komplexet és a folyadékot keverni, így injekciózásra alkalmassá tesszük azzal, hogy a csapadékot eloszlatják a folyadékfázisban. 30 Az inzulinsó és a protamin közötti kapcsolat pontos természete nem ismert, ez a kapcsolat azonban elég erős ahhoz, hogy az oldhatatlan komplexet könnyen elkülöníthessük a folyadék-35 fázistól és a könnyű szállítás vagy az igen hosszú időtartamú tárolás céljából száríthassuk. A termék ugyanis szárítva korlátlan ideig tárolható. Kezdetben úgy gondoltuk, hogy a protamin-in-40 zulinsó-komplex adagolásakor megfigyelt gyors hatás az anyalúgban jelenlevő szabad inzulinnal magyarázható, azonban az analitikai mérések kiértékelésekor kiderült, hogy a készítményben a teljes inzulin-aktivitásnak csak 0,015%-a maradt az ol-45 dószerben oldható formában. Az inzulin és a protamin kapcsolata egészen laza, ezért az inzulin adagolás után könnyen felszívódik. Az is nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti eljárással előállított komplex természete különbözik az ismert keres-50 kedelmi protamin-cinkinzulinokétól, ugyanis ezeknél az inzulin lehasadása a komplexről sokkal lassabb a szövetekben, és így a hatása is lassabban jelentkezik. 55 A protamin-inzulinsó-komplexet 6,5-8,0, előnyösen 7,2-7,6 pH-jú folyadékban állítjuk elő. Az inzulin alkálifémsójának előállítására a nyers inzulint alkálifém-ionok jelenlétében kezeljük, 60 amikor az inzulin alkálifémsója kikristályosodik. Gazdasági okokból és az eljárás könnyű kivitelezése érdekében az inzulin alkálifémsójának előállításakor alkálifém-ionforrásként előnyösen nátriumhidróxidot használunk. A nátriumsót úgy állítjuk elő, 65 hogy a nyers inzulint vizes oldatában olyan 2