166989. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulinsó-protamin komplex vizes szuszpenziójának előállítására

166989 mennyiségű nátriumhidroxiddal kezeljük, hogy az oldat pH-ja 8,0 és 8,5 között legyen. A lúgos pH-jú oldatot legalább 15 percen át, előnyösen egy órán át, vag$ hosszabb ideig enyhén keverjük. Az inzulin nátiiumsója az oldatból kicsapódik, a csapadékot dekantálással, centrifugálással, szűréssel és meghatározzuk a kezdeti vércukor-tartalmat. A kontroll-nyúlcsoportot az előzőleg meghatározott mennyiségű semleges protamin-Hagedorninzulinnal (NPH) oltjuk be. A kísérleti csoportot a protamin-nátriuminzulin-komplex-szel (PSÍ) oltjuk be. Mindegyik kísérletben egyszeres dózisként 1,0 egységet adagolunk egy nyúlnak, ez körülbelül 0,01 ml térfogatú inzulinkészítménynek felel meg. Az adagolás után fél órával mindegyik nyúlból ismét vérmintát veszünk. A következő vérmintákat az injekció beadásától számítva az 1,5., 3,0., 5,0., 7,0. és 9,0. órában vesszük. Mindegyik minta vércukortartalmát meghatározzuk, és az eredményeket mint mg-glükóz% adjuk meg. Az átlagos vércukortartalmat minden mintavételkor mindkét csoportra vonatkozóan megadjuk. Azokban az esetekben, amelyekben „kereszt"-kísérleteket végzünk, azok a nyulak, amelyeket előzőleg a kontroli-mintával oltottunk, most a protarnin-nátriurninzulin-komplexet kapják, és megfordítva. Ezeket a kísérleteket az első vizsgálat befejezése után egy héttel kezdtük. Az átlagolt eredményeket mint átlagos vércukor-koncentrációkat (mg%) az 1. ábrán és az alábbi 1. táblázatban adjuk meg. vagy hasonló módon könnyen elkülöníthetjük. Az inzulin-nátriumsót ezután újra feloldva és kicsapva tisztíthatjuk, amikor kristályos anyaghoz hasonló terméket kapunk. Az analízis eredménye 5 szerint az inzulin nátriumsójának 1 molekulájában 1 molekula inzulin és 1 nátriumatom van. A nátriuminzulin kristályok, függetlenül attól, hogy marha- vagy sertéseredetű az inzulin, vízben és izotóniás oldószerekben a semlegeshez közeli pH-ér-10 téken igen jól oldódnak. Az előnyös alkálifém- vagy fémszerű ionok, amelyekkel inzulinsó előállítható, a kálium-, lítium-, cézium-, nátrium- vagy ammónium-ionok. 15 A protamint előnyösen protaminszulfát más oldható vegyület alakjában használhatjuk. vagy Ha a protaminszulfát és inzulinsó komplexét 20 izotóniás hígítóanyagban szuszpendáljuk, a hígító előnyösen tartósítóanyagot tartalmaz. Előnyös tartósítóanyag a fenol és a metil-p-hidroxilbenzoát. A protamin-inzulin-komplex biológiai aktivitását 25 nyulakkal a következő módon határozzuk meg: Harminchat nyulat két egyenlő csoportra osztunk és a kezelés kezdete előtt 24 órán át 30 éheztetjük őket. Mind a vizet, mind az élelmet a kísérlet tartama alatt megvonjuk az állatoktól. Az állatok fülének külső eréből vérmintát veszünk 35 1. táblázat Vércukor-tartalom , mg% Idő, óra 0 0,5 1,5 3,0 5,0 7,0 9,0 Kontroll (NPH) 83,8 64,9 43,3 41,3 64,6 67,4 69,8 PSI 80,1 51,1 36,9 36,1 51,1 60,6 70,9 Megjegyezzük, hogy a protamin-nátriuminzulinkomplex adagolásakor a hatás gyorsabban jelentkezik, és ez a hatás hosszabb ideig fennmarad, 50 mint az NPH esetén. A következő kísérletben a PSI (protamin-nátriuminzulin) hatását és az ARI (inzulinsav) és NPH, az aktivitás alapján meghatározott 55 1 :1 arányú keverékének hatását hasonlítjuk össze. A protaminszulfát koncentrációja 0,8 mg/ml. A kísérlet során 36 nyulat vizsgálunk, „kereszt"kísérletben. Mindegyik nyulat 0,01 ml inzulinkészítménnyel oltunk be, ez a mennyiség megfelel 1 egység inzulinnak injekcióként. Az eredményeket a 2. ábrán és az alábbi 2. táblázatban foglaljuk össze. 2. táblázat Vércukor-tartalom, mg% Idő, óra 0 0,5 1,5 3,0 5,0 7,0 9,0 ARI + NPH 88,0 45,9 34,2 43,5 71,6 84,2 88,6 PSI 87,2 59,3 47,1 45,2 51,9 58,0 64,3