166913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aszparaginil-peptidek előállítására

166913 3 4 chem I. és munkatársai, J. Am. Chem. Soc. 93, 5526 (1971)] 45%-os kitermeléssel, a pentaklórfenilésztert [Mukaiyama T. és munkatársai, Tetrahedron Letters, 1970, 5293] 74%-os kitermeléssel és az N-hidroxiszukcinimid-észtert [Sakakibara Sh. és Hase S., Bull. Chem. Soc. Japan 41, 2816 (1968)]. Nem mondható sikeresnek a Z-Asn-N-karboxianhidrid előállítása, nemcsak az alacsony 35%-os kitermelés, hanem acilezési képességének gyenge volta miatt sem [Hirschmann R. és munkatársai J. Am. Chem. Soc. 93, 2746 (1971)]. A pentafluorfenilészterek nagy reakcióképessége közismert [Kisfaludy L. és munkatársai Proc. Eur. Peptide Symp., 8th, Noordwyk, Hollandia 1966, 25—27 (1967); Kovács J. és munkatársai, J. Am. Chem. Soc. 89, 183 (1967); Kisfaludy L. és munkatársai, J. Org. Chem. 35, 3563 (1970)], ennek ellenére a nitrogénen védett aszparagin pentafluorfenilészterével történő acilezés, és magának az acilező komponensnek az előállítása a fent említett mellékreakciók miatt nem látszott célravezetőnek. Meglepő módon azt találtuk, hogy aszparaginil-peptidek kitűnő kitermeléssel és mellékreakcióktól mentesen állíthatók elő, ha az acilezést az új, az aminocsoport nitrogénatomján védett aszparagin-pentafluorfenilészterrel végezzük. Találmányunk tehát eljárás adott esetben védőcsoportot tartalmazó aszparaginil-peptidek előállítására valamely, adott esetben védőcsoportot tartalmazó aszparaginil-peptidek előállítására valamely, adott esetben védőcsoportot tartalmazó aminosav- vagy peptid-származék aminocsoport nitrogénatomján védett aszparagin-észterrel történő acilezése, majd kívánt esetben a védőszercsoport lehasítása útján, melynek lényege, hogy az aminosav- vagy peptid-származékot 0 és 25 °C közötti hőmérsékleten vízmentes szerves oldószerben aminocsoport nitrogénatomján védett aszparagin-pentafluorfenilészterrel acilezzük. A kiindulási anyagként használt új, N-védett aszparagin-pentafluorfenilészter megfelelő reakciókörülmények alkalmazásával Z-Asn-OH-ból 93'%-os kitermeléssel állítható elő, és a lehetséges melléktermékek képződése gyakorlatilag teljesen visszaszorul. Az aminocsoport nitrogénatomjánakvédésére például benziloxikarbonil-csoportot használhatunk, de egyéb, a peptidkémiában szokásos védőcsoport is alkalmazható. Előnyösen úgy járhatunk el, hogy feleslegben alkalmazott pentafluorfenolt és a Z-Asn-OH-t dimetilformamid és dioxán elegyében feloldjuk, az oldatot 0 °C körüli hőmérsékletre lehűtjük, majd keverés közben körülbelül 10%-os feleslegben diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá, és 2 óra hosszat 0 °C-on reagáltatjuk. Ezután a reakciókeveréket ismert módon feldolgozzuk. Az N-védett Asn-OPFP mellékreakciómentesen alkalmas aminosav- vagy peptid-származékok acilezésére, és az aszparaginil-peptideket nagyon jó kitermeléssel kapjuk. Az eljárás további előnye, hogy a reakció során nincs szükség bázis feleslegre, mivel az általában reakcióközegként használt dimetilformamidban — az irodalmi adatokkal ellentétben [J. Am. Chem. Soc. 89, 183—184 (1967)] — a pentafluorfenol pK értéke 6,35, és így a reakcióban felszabaduló fe-5 nol a reakciókeveréket nem savanyítja meg anynyira, hogy a kapcsolási reakció idő előtt lefékeződne. A találmányunk szerinti eljárást a kiindulási anyagok oldékonyságától függően vízmentes 10 szerves oldószerben, például dioxánban, dimetilformamidban vagy ezek elegyében végezhetjük. A reakcióhőmérsé'klet 0 °C és 25 °C között van, előnyösen szobahőmérsékleten dolgozhatunk. Dipeptidek acilezésekor célszerűen az aiminkom-15 ponenst, míg peptidek acilezésekor az acilezőszert kis feleslegben alkalmazzuk. A reakcióidő általában 30—60 perc, de kevesebb is lehet. A kapott reakciókeveréket szokásos módon dolgozhatjuk fel. 20 A védőcsoportok eltávolítása ismert módon, például katalitikus hidrogénezéssel vagy savas kezeléssel történhet. A találmány szerinti eljárás aszparaginil-csoportot tartalmazó, biológiailag hatásos peptidek, 25 például az adrenokortikotrop hormon közbülső termékeinek előállítására alkalmazható. A találmány szerinti eljárást az alábbi példák szemléltetik anélkül, hogy azt ezekre korlátoz-30 nánk. A példákban használt rövidítések a IUP AC— IUB által elfogadottak [J. Biol. Chem. 247 977 (1972)]. Az olvadáspont meghatározások dr. Tottoli-féle (Büchi, Svájci) készülékben történtek, 35 és nem korrigáltak. A vékonyréteg kromatográfiás vizsgálatokat „Silicagel nach Stahl" (Merckcég) adszorbensen végeztük az alábbi kifejlesztőszerekkel : 1. Etilacetát-(piridin: ecetsav-víz = 40 = 20:6:11) = 4:1 2. Etiliacetát-(piridin:ecetsav:víz = =20:6:11) = 9:1 3. Etilacetát-(piridin :ectesav-víz = = 20:6:11) = 3:2 45 4. Kloroform:hexán:ecetsav = 8:1:1 Az előhívás a klór-|-tolidines technikával történt. A fajlagos forgatóképesség mérése Perkin Elmer 141 fotoelektromos polariméteren történt. 50 1. példa N-Benziloxikarbonil-L-aszparagin-pentafluorfenilészter 1,33 g (5 mmól) Z-Asn-OH-t és 3,04 g (16,5 53 mmól) pentafluorfenolt 3,5 ml dimetilformamidban feloldunk és hozzáadunk 10,5 ml dioxánt. Az oldatot ezután 0 °C-ra lehűtjük, és keverés közben hozzáadjuk 1,13 g (5,5 mmól) diciklohexilkarbodiimidet. Ezután a reakciókeveréket két 60 óra hosszat 0 °C-on keverjük, majd a diciklo- _, hexilkarbamidot kiszűrjük, és a szüredéket csökkentett nyomáson bepároljuk. A száraz maradékot 8 ml száraz éterrel dörzsöljük, és a kristályos fehér anyagot kiszűrjük, majd kevés hi-65 deg éterrel mossuk. Kitermelés: 2,02 g (93,3'%) 2