166890. lajstromszámú szabadalom • Eljárás FC-126 pulykaherpesvírus és Marek-betegséget okozó JM GA vírus stabil szuszpenziójának és liofilizátumának előállítására

166890 9 vont FC—126 pulyka-herpesvírus koncentrációja azonos azzal az értékkel, amelyet akkor kapunk, ha a vírusok kivonásához Witter és mtsai által ismertetett közeget használunk (Am. J. Vet. Res. 31, 525—538 (1970)). Az SPGA-kivonatok koncentrációja gyakran 30—50-szerese a PBS-kivonatok koncentrációjának, és a liofilizálást követően a túlélő vírusok száma SPGA kivonatok esetén rendszerint 30—40%, míg PBS kivonatok esetén általában 1%-nál kisebb érték. A 2., 4., 6. és 7. kísérletben a liofilizált vírusokat 17—44 napig 4 °C-on tároljuk, majd újra vizsgáljuk. A vírusok koncentrációja az eredetileg meghatározotthoz képest nem változik. 10 15 10 A 9. és 10. kísérletek eredményeit a 3. táblázatban ismertetjük. Az eredményekből megállapítható, hogy az albumin önmagában vagy szacharózzal és/ vagy glutamáttal elegyítve megfelelő stabilizálószer vírusok kivonásához, ugyanakkor a szacharóz adagolása előnyösen befolyásolja a liofilizálást túlélő vírusok mennyiségét. A zsírtalan tejpor önmagában vagy NZ aminnal együtt ugyancsak megfelelő •stabilizálószer a vírus kivonásához, és az így kapott víruskészítmények liofilizálhatók. Az egyéb anyagok (pl. szarvasmarha magzatszérum, 10% BFS M199 közegben vagy 10% dimetilszulfoxid és 10% triptóz-foszfát M199 közegben) a kivonás alatt részleges stabilitást biztosítanak, a stabilizáló hatás azonban kisebb az előzőeknél. 1. táblázat Különféle kezelések és stabilizálószerek hatása a bőrből kivont, sejtmentes, Marek-féle megbetegedést okozó JM herpesvírus-törzs koncentrációjára Kísérlet száma Vírus száma Hígítószer és hígítás FFU/ml hígítatlan vírus liofilizált, vízzel rekonstruált nem liofilizált 1. X—300 nem alkalmaztunk 20% glükóz, 1:2 -lefölözött tej, 5% glükóz, 1:5 SPGA, 1:5 SPG-NZamin, 1:5 2. X—311 nem alkalmaztunk SPGA, 1:5 3. X—300 nem alkalmaztunk PBS, 1:10 SPGA, 1:10 A rövidítések jelentése: FFU = foltképző egység; PBS = foszfáttal pufferolt sóoldat (pH = 6,8); SPGA és SPG-NZ amin: lásd a stabilizálószerek felsorolása „—" nem vizsgált. 2. táblázat Különféle kezelések és stabilizálószerek hatása megfertőzött sejttenyészetből kivont, sejtmentes, Marek-féle megbetegedést okozó herpesvírus-törzsek (MDHV, JM és GA törzs) és pulyka-herpesvírus (HVT) FC 126 törzs koncentrációjára 2800 100 1680 690 2400 360 5600 4900 4800 3120 690 10 1330 480 2160 — 2880 — 4000 — Kísérlet száma Vírus típusa (törzs) 4. MDHV(JM) 5. MDHV(GA) 6. HVT(FC125) 7. HVT(FC126) 8. HVT(FC126) Kezelés módja FFU/kivonáshoz felhasznált hígítószer, ml Teljes sejtszusz- PBS SPGA penzió fagyasztás liofilizálás fagyasztás liofilizálás fagyasztás liofilizálás fagyasztás liofilizálás fagyasztás liofilizálás A rövidítések jelentése: PBS = foszfáttal pufferolt sóoldat; FFU = foltképző egység; SPGA = lásd a stablilizálószereknél; „—" nem végeztünk kísérletet. b = az inokulumhoz 0,2

% EDTA-t adtunk. 58 000 120 220 — 0 820 94 000 170 — 0 3 850 68 000 1370 398 000 — 0 125 000 90 000 910 147 000 — 5 72 000 240 49 400 144 000 — 0 96 000