166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
67 166686 68 adunk hozzá. A szerves fázist elválasztjuk, 10 ml telített káliumkarbonátoldattal extraháljuk, a vizes fázist pedig 15 ml metilénkloriddal extraháljuk. Az egyesített metilénkloridos fázisokat vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A maradékot 50 ml etilacetátból kikristályosítjuk. 4,4 g tripeptidszármazékot kapunk, op.: 109—112°. Aceton-metanol-éter (10 : 4 : 6) elegyből átkristályosítva 144,5—145,5° olvadáspontú kristályokat kapunk (kristálypolimorfia). [a]g> = —93° (c = 1,0, metanolban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során kloroform-metanol (8 : 2) rendszerben Rf = 0,38. 2 43. H-Gly-Ala-Pro-NH2 18,8 g 42. pontban előállított nyers tripeptidszármazékot 400 ml dimetilformamidban oldunk és 1,0 g 10%-os palládiumszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénezés befejeztével az elegyet leszűrjük, és az oldatot rövid gáztalanítás után a következő lépésnek vetjük alá. 44. Z-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 A 43. pontban keletkezett tripeptidamidoldathoz (550 ml) 20,1 g Z-Val-p-nitrofenilésztert adunk, és az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután 50—60°-on és 0,01 torr nyomáson szárazra pároljuk, a maradékot 300 ml éterrel eldörzsöljük és szűrjük. A szüredéket szárítjuk, és 210 ml abszolút etanolban 15 percig 70—80°-on keverjük, 0°-ra hűtjük és szűrjük. A maradékot 170 ml abszolút tetrahidrofurán, 25 ml víz és 110 ml éter elegyéből átkristályosítjuk. Op.: 209—211°. Rf -érték szilikagéles lemezen 0,42, kloroform-metanol (8 :2) rendszerben. 45. H-Val-Gly-Aía-Pro-NH2 1,1 g Z-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 vegyületet 50 ml 80%-os metanolban oldunk, és az oldatot 0,3 g 10%-os palládium-szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel megszűnése után a katalizátort leszívatjuk, az oldatot bepároljuk, és a maradékot nagy vákuumban 35° fürdőhőmérsékleten szárítjuk. A H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 tetrapeptidet színtelen anyagként kapjuk, Rr értéke 0,20 (szilikagéles lemezen, kloroform-metanol 1 : 1 rendszerben). 46. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 800 mg 40. pontban leírt peptidszármazékot, 500 mg H-Val-Gly-Ala-Pro-NHa vegyületet és 170 mg N-hidroxiszukcinimidet 10 ml dimetilformamidban oldunk, nagy vákuumban térfogatának kb. felére párolunk be és 250 mg diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd éterrel kicsapjuk, és az anyagot elválasztjuk. Craig-extrákcióval, metanol-puffer (az 1. példában leírt)-kloroform-széntetraklorid (10 : 3 : 5 : 6) elegyben tisztítjuk. K. = 0,29. A megoszlatásból izolált tiszta termék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során 0,62 Rfl07 értéket ad (szilikagéles lemezen). 47. H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 300 mg fenti peptidszármazékot 30 ml 80%-os ecetsavban oldunk és 100 mg 10%-os palládiumszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Teljes dekarbobenzoxileződés után a katalizátort leszűrjük,a szűrletet nagy vákuumban 30°-on erősen bepároljuk, és a maradékot terc-butanolból liofilizáljuk. A maradékot 10 ml metanolban oldjuk, 1 n nátriumhidrogénkarboriát oldatot hozzáadva enyhén meglúgosítjuk, és 0,1 n nátriumkarbonátoldatba csepegtetve kicsapjuk. Az elválasztott terméket mégegyszer hasonló módon kicsapjuk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rfl00 = 0,34. 48. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Nva-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 23 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Nva-Leu-Gly-OH vegyületet (1. 8. pont), 35 mg H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 vegyületet, 7 mg N-hidroxiszukcinimidet, 8 mg diciklohexilkarbodiimidet és 0,5ml dimetilformamidot 4 órán át 45°-on keverünk. Ezután 15 ml étert adunk hozzá, és a finom csapadékot leszívatjuk. Tisztítás céljából a nyers terméket multiplikatíve 35 lépcsőben metanol-puffer-kloroform-széntetraklorid (11 : 3 : 6 : 7, puffer az í. példában leírt) megoszlatjuk. 5. példa H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Abu-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro -Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 . acetát (Abu8-kalcitonin M. acetát) 1,8 g finoman porított BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser--(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Abu-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 vegyületet 50 ml jéghideg, tömény sósavban felveszünk, 10 percig 0°-on keverjük, 300 ml jéghideg, 10%-os ecetsavba öntjük, és Merck-II típusú, acetátciklusú ioncserélő oszlopon szűrjük. Az oldatot 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 34
