166456. lajstromszámú szabadalom • Berendezés mikroorganizmusok vizsgálatára
7 166456 8 változtatja meg a mikroorganizmusok tenyésztése következtében kialakult színeket, s így a 10. berendezés vagy pusztán all. szűrőpapír a vizsgálat dokumentumaként megtartható. A kérdésben jártas szakértő előtt ismeretes, hogy a legtöbb koncentráció-vizsgálat során a minta egy milliliterében jelenlevő mikroorganizmus relatív koncentrációját tizes egységekben fejezik ki. Ennek magyarázatára példaként a 3—6. ábrákon látható telepeket mutatjuk be. A hordozóanyagon különböző mennyiségben alakultak ki telepek: 3. és 4. ábrán látható 23a. és 23b. telepek könnyen megszámolhatok, az 5. és 6. ábrákon megfigyelhető 23c. és 23d. telepek mennyisége azonban olyan nagy, hogy megszámolásuk már nehézkes. Mivel azonban a telepek száma viszonylagos, a milliliterenkénti mikroorganizmus-koncentráció vizuális úton könnyen megállapítható, ha a 11. szűrőpapíron megjelenő telepek sűrűségét összehasonlítókártyával vagy szabványos mintával vetjük össze. Tételezzük fel, hogy a 3—6. ábrákon látható 11a.— lld. szűrőpapírok közül mindegyik 0,2 ml vizes mintát abszorbeál. A 3. ábrán feltüntetett 23a. telepek száma és intenzitása alapján könnyen megállapítható, hogy a minta 0,2 ml-e 4 mikroorganizmust, azaz a minta 1,0 ml-e 20 mikroorganizmust tartalmaz. Mivel a mikroorganizmus-koncentrációra csak relatív koncentrációt szokás megadni, azt mondhatjuk, hogy a minta 101 mikroorganizmust tartalmaz milliliterenként. A 4. ábrán látható telepek száma alapján a minta milliliterenként 102 , azaz 100 mikroorganizmust tartalmaz. Az 5. és 6. ábrán látható 23c. és 23d. telepek száma olyan nagy, hogy a minta mikroorganizmus-koncentrációjának meghatározására a telepek sűrűségét állapítjuk meg. Az 5. ábra 103 , azaz kb. 1000 mikroorganizmust jelez milliliterenként, a 6. ábra 104 mikroorganizmust milliliterenként. A 103 mikroorganizmus/milliliternél nagyobb mikroorganizmuskoncentrációk all. szűrőpapíron mint lényegileg homogén színek jelentkeznek. Az alábbiakban a találmány szerinti berendezés bemutatására példákat ismertetünk. 1. példa Vizsgálati berendezés 20,0 g nátriumalginátot hozzáadunk 1 liter desztillált vízhez és az elegyet oldódásig keverjük. A kapott oldathoz a következő anyagokat adjuk: borjúagy-infúzió 220 g szarvasmarhaszív-infúzió 275 g (a Difco Corporation cég terméke) proteóz pepton 11 g (a Difco Corporation cég terméke) szőlőcukor 2,2 g nátriumklorid 5,5 g dinátriumfoszfát 2,75 g trifeniltetrazóliumklorid 0,165 g poliszorbát 80 0,1 ml (polioxietilén-szorbitán-monodeát) A fenti anyagok hozzáadása után az elegyet oldódásig keverjük. A kapott alginátoldat végső pH-ja 7,4. Az így előállított oldatba „Shleicher and Schül No. 470" (a Shleicher and Schütt cég terméke) márkájú szűrőpapír-csíkokat merítünk telítésig, majd a paplrcs -kokat két szorosan összeillesztett üvegrúd között húzzuk át a feleslegben levő oldat eltávolítására és az egységes impregnálás biztosítására. A papírcsíkokat 55 °C-on, 5 meleg levegő átfuvatással ellátott kemencében 2 órán keresztül szárítjuk, majd a dehidratált csíkokat 1 X 2 cm méretű tömbökre vágjuk szét. A fenti méretű csíkok 0,2 ml folyadékot abszorbeálnak. A papírcsíkokhoz úgy készítünk fogantyút, hogy poli-10 etilén tereftalát lemezeket kb. 1 X 6 cm méretű csíkokra vágunk, majd a papírcsíkokat párnázott asztalra helyezzük, és minden egyes csíkra vékony polietiléncsíkot helyezünk. A papírcsíkokat ezután úgy helyezzük a polietiléntereftalát csíkokra, hogy minden egyes papírcsík 15 egy-egy polietiléntereftalát csík végéhez csatlakozzon. Ezután a csíkok végére kb. 138 °C-ra melegített lemezt helyezünk, kb. 5 másodpercig ott tartjuk, s így a polietilén lemezt megolvasztva a polietiléntereftalát csíkokat és a papírcsíkokat összekötjük. A fogantyúkat és a hoz-20 zajuk csatlakozó papírcsíkokat ezután leforrasztható átlátszó tartályokba helyezzük és etilénoxiddal sterilizáljuk. 2. példa 25 Félkvantitatív vizsgálat a) Félkvantitatív vizsgálati minta készítése Escherichia coli, Proteus mirabilis, Aerobacter aero-30 genes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus és Streptococcus faecal is mikroorganizmusok tenyésztésével vizsgálati mintákat állítunk elő. A tenyésztéseket „Brain—Heart Infusion" tápközegben, (a Difco Corporation cég terméke) a maximális turbiditás (1 — 5 • 109 35 sejt/ml koncentráció) eléréséig folytatjuk. A tenyészetekből sóoldat hígítószer alkalmazásával tízszeres sorozathígításokat készítünk, s így olyan baktériumszuszpenziókat állítunk elő, amelyek elméleti koncentrációja 101 -10 7 sejt/ml. 40 b) A minták vizsgálata A fentiek szerint előállított baktériumszuszpenzióhígításokat az 1. példa szerint készített vizsgálati beren-45 dezéssel vizsgáljuk. A vizsgálatot úgy végezzük, hogy a tartályt felnyitjuk és a fogantyút és papírcsíkot kivesszük belőlük. A steril, dehidratált hordozóanyagot a mintába mártva dehidratáljuk és inokuláljuk, majd a fogantyúval együtt ismét visszahelyezzük a tartályba. A tartályt a 50 dehidratálás megakadályozására lezárjuk és 12 órán keresztül 37 °C hőmérsékletű inkubátorban tartjuk. A megvizsgált minták sejtkoncentrációját a szokásos sejtszámlálási módszerekkel meghatározva igazoljuk a minták számított koncentrációját; az így kapott eredménye-55 ket használjuk összehasonlítóként a vizsgálati berendezés eredményének igazolásához. Az inkubálási periódus letelte után a berendezéseket kivesszük az inkubátorból és a hordozóanyagokat az átlátszó tartályfalon keresztül megvizsgáljuk. A mikro-60 organizmusok a színtelen trifeniltetrazóliumot bíborvörös színű trifeniltetraformazánná redukálják a minták vizsgálatára alkalmazott összes papírcsíkon. Azokon a csíkokon, amelyek 105 sejt/ml koncentrációnál hígabb mintákkal lettek inokulálva, a kialakult baktériumtele-65 péknek megfelelően elkülönült bíborvörös foltok figyel-4
