166412. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikum előállítására

3 166412 4 1966 „Methods for Characteriazation of Streptomyces Species", Intl. J. Systematic Bact. 16: 313—340 ajánlásainak felel meg. A diagnosztikai jellemzők meghatározásához használt táptalajok és a morfológiai leírás a Difco Laboratories által az ISP részére kidolgozott adatoknak felelnek meg. A táptalajok azonosítását és összetételét az 1. táblázatban ismertetjük. A színek elnevezését az alábbi négy forrásból vettük: ISCC—NBS U. S. Department of Commerce, 1955, „The ISCC—NBS method of designating colours and a dictionary of colour names", National Bureau of Standards Circular 553, U. S. Goverment Printing Office, Washington, D. C; Tresner, N. D. és E. J. Backus, 1963 „System of colour wheels for Streptomycete taxonomy", Appl. Microb., 11: 335—338; Eckerstrom, R. és C. E. Foss, 1958, Colour Harmony Manual, 4. kiadás, Container Corporation of America, Chicago, Illinois; H. Pruser, 1964. „Aptness and Application of Colour codes for Exact Description of Colours of Streptomycetes", Z. Allg. Mikrobiologie, 4 (1): 95—98. Növekedés mértéke A tenyészet sok táptalajon jól fejlett és elágazó szubsztrátum micéliumot és jellemző légmicéliumot képez. A szubmerz növekedés kemény és durva és az alkalmazott táptalajtól függően színtelen, sárga, sárgásbarna vagy olajbarna. Élesztő-maláta extrakt agáron (2 számú ISP táptalaj) a szélen barnásfekete foltok jelentkeznek. Légmicélium és/vagy spóraszín (en masse)* A légmicélium közepesen fejlett, szerkezete bársonyos, pigmentációja szürkésfehér, világos (d), közepesen szürke (2 fe) és sárgásszürke (2 de), a növekedés korai szakaszában vékony fehér széllel. A légmicélium színe a (Tresner—Backus színskála alapján) ISP 2 táptalajon Gy és a ISP 4 és 5 táptalajon W—Gy. Gyakran koncentrikus gyűrűk képződnek és telepszerű felosztás lép fel. A színjellemzők alapján a törzs a szürke sorozatba tartozik (Pridham). A Streptomyces Sp. törzsnek bizonyos tulajdonságait a szürke sorozatba tartozó más törzsekkel a 2. táblázatban hasonlítjuk össze. Morfológia A légmicéliumon képződő spóraláncok monopodiálisan és szinpodiálisan elágazók, egyenes láncokat, hurkokat, kampókat, kiterjedt és szabálytalan spirálokat (3—4 fordulat) képeznek, melyek seprőszerű elrendezésben is jelentkeznek. A láncok hosszúak és rövidek egyaránt lehetnek, azonban túlnyomórészt 10-nél több spórából állnak. A legtöbb táptalajon sclerotium-ok figyelhetők meg. A spórák ovális-nyújtottak és henger alakúak (Phalangi-alak, Tresner). A spórák felülete elektromikroszkópos vizsgálat (paradicsompüré agar, 10 nap 28 C°-on) szerint sima, díszítettség nélkül. * az „en masse" kifejezés a spóráknak tömegben mutatott színére utalszemben az egyes különálló spórák színével. Fiziológia Oldható pigment Élesztőextrakt-maláta extrakt agar táptalajon (ISP 5 2. sz. táptalaj) barna pigment nyomok mutatkoznak, az ISP 3., 4. és 5. sz. táptalajon azonban nem. Hátoldal színei 10 ISP 2., 4. és 5. sz. táptalajon 7—21 nap alatt sárgasárgásbarna és zöld szín képződik. Dr. Prauser színmutatója szerint 7 nap alatt az alábbi hátoldali színek képződnek: C 004 b, Co 5 m színtelen széllel (2. sz. táp-15 talaj) és Co 5a, Co 5b (4. és 5. sz. táptalaj). Lúg vagy sav hozzáadása a hátoldal színét nem változtatja. Különböző fiziológiai reakciók 20 A tenyészet pepton-vas és tirozin agáron valamint tripton-élesztő extrakt táptalajon kromogén (melamint termel). A Streptomyces Sp. X—5108 törzs fontosabb jellemzőit a 3. táblázatban foglaljuk össze. A törzs szer-25 ves nitrát táptalajon nitrátokat nem redukál; keményítőt aktívan hidrolizál és zselatint 14 nap alatt csak nagyon kis mértékben folyósít el. Egyéb fiziológiai reakciókat a 4. táblázatban ismertetünk. A szénforráshasznosítás Pridham és Gottlieb módszere szerint a következő: 30 (J. Bact., 56, 107—114 (1948) 11 nap 28 C°-on:) A törzs jól hasznosít 1-arabinózt, d-fruktózt, d-mannitot, 1-ramnózt, d-raffinózt és szacharózt; gyengén hasznosít: d-xilózt, i-inozitot; nem hasznosít: cellulózt. 35 A szén-nitrogén hasznosításra vonatkozó jellemzőket az 5. táblázat tartalmazza. A tenyészet 24 C°-on és 37 C°-on jól, míg 42 C°-on vagy 50 C°-on nem növekedik. A spórák díszítettsége és általános morfológiája, a 40 sporofórok elágazása, a különböző táptalajokon „en masse" mutatott szín, valamint biokémiai és fiziológiai reakciók alapján megállapítható, hogy a Streptomyces Sp. X—5108 törzs az irodalomban leírt, a szürke sorozatba tartozó bármely törzstől különbözik. A Streptomyces 45 Sp. X—5108 törzsnek a kívánt X—5108 antibiotikumot termelő fermentációját számos fermentációs módszer segítségével elvégezhetjük. A lombikban és fermentorban végrehajtott eljárások során általában az alábbi technológiákat alkalmazhatjuk. 50 Lombikban történő fermentációnál a törzs ferde agartenyészetéből kacsnyi spórát 500 ml-es Erlenmeyer lombikban elhelyezett 100 ml táptalajba beoltunk és forgó rázógépen 28 C°-on 7 napig terjedő időtartamon át inkubáljuk. In vitro kísérletekhez a 3., 5. és 7. napon 55 aszeptikusán teljes mintát veszünk. Hasonlóképpen nagyobb fermentlé mennyiségek előállítása esetén előbb 6 lt-es Erlenmeyer rázólombikokban vagy 20 literes levegőztető és mintavezető szerelvényekkel ellátott Pyrex üvegekben inokulumot készítünk, melyet fermentorba 60 visszük át. A levegőztetést a lombikban és fermentorban oly módon végezzük el, hogy a táptalajon steril levegőt nyomatunk keresztül. Fermentorokban mechanikai berendezéssel további keverést létesítünk. A habzás megakadá-65 lyozása céljából szükség esetén habzásgátlókat (pl. sza-2