166407. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fokozottan vízoldékony peptidamidok és azok származékainak előállítására
166407 9 10 0,582 ml (5,24 mmol) N-metil-morfolin és 0,7 ml (5,24 mmól) klórszénsav-izobutilészter felhasználásával 10 ml dimetilformamidban a 2. példa 3. lépésben leírt módon vegyes anhidridet készítünk és azt reagáltatjuk 3,16 g (5 mmól) tetrapeptidészterrel (2. példa, 5. lépés), melyet 10 ml dimetilformamidban oldunk fel. A reakcióelegyet 400 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba öntjük, a kivált csapadékot szűrjük, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 1 n citromsavval, vízzel és éterrel mossuk, majd szárítjuk. 4,45 g (92%) védett pentapeptidésztert kapunk. Op.: 203° (bomlik); R? 0,35—0,48. A fentihez hasonló módon készített Z-Arg(N02 )-Thr-Asn-Thr-Gly-OtBu 63% hozammal különíthető el. A feldolgozás során a reakcióelegyet vízzel telített n-butanolban oldjuk, az oldatot vízzel mossuk. A vizes butanol-oldatból a végtermék részben kiválik, az anyagkiválás éteres hígítással tehető teljessé (op.: 147°; Rf 0,55—0,65). 7. lépés: Z-Arg(N02 )-Thr-Asn(Mbh)-Thr-Gly-OH 4,45 g (4,6 mmól) védett pentapeptidésztert (2. példa, 6. lépés) feloldunk 100 ml 50%-os vizes piridinben, majd keverés közben 4,9 ml 1 n nátrium-hidroxidot csepegtetünk hozzá. Két órai keverés után az oldatot bepároljuk és a maradékot eldörzsöljük 1 n citromsavval, szűrjük, citromsav-oldattal és vízzel mossuk, majd szárítjuk. 4,1 g (97,1%) szabad C-terminálisa védett pentapeptidet kapunk. A nyersterméket feloldjuk 100 ml forró metanolban, hozzáadunk 30 ml vizet, az oldatot csontszénnel derítjük, majd a szén kiszűrése után további 30 ml vizet adva hozzá hűtjük. A kivált anyagot szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 3,45 g (78,8%) tiszta végterméket kapunk. Op.: 203—205°; Rf 0,45—0,55. A Z-Arg(NOa )-Thr-Asn-Thr-Gly-OH a megfelelő terc-butilészter trifluorecetsavas szolvolízisével készült 80,4%-os hozammal (op.: 166—168°; R? 0,4—0,5). 3. példa Z-Arg-Thr-Asn(Mbh)-Thr-Gly-OH szintézise A 2. példa 3. lépésében leírt módon vegyes anhidridet készítünk 35 ml dimetilformamidban 5,86 g (17 mmól) karbobenzoxi-arginin-hidroklorid, 1,89 ml (17 mmól) N-metil-morfolin és 2,25 ml (17 mmól) klórszénsavizobutilészter felhasználásával, majd 35 ml dimetilformamidban oldott 10,2 g (16,15 mmól) tetrapeptidészterrel reagáltatjuk (2. példa, 5. lépés). A reakcióelegyet 1,5 liter 15%-os konyhasó-oldatba öntjük, a kivált anyagot szűrjük és konyhasó-oldattal mossuk (Rj 0,46—0,56), majd melegen feloldjuk 510 ml metanol és 50 ml víz elegyében. Az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, és keverés közben, kb. 3 óra alatt hozzácsepegtetünk 17 ml 1 n nátrium-hidroxidot. Az oldatot éjszakán át állni hagyjuk. A kivált anyagot szűrjük, vizes metanollal mossuk és szárítjuk. 11,77 g (84,5%) védett pentapeptidet kapunk. Op.: 196°; Rf 0,3—0,4. A fentihez hasonló vegyes anhidrides kapcsolással állítható elő a Z-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-OtBu, melyet szihkagél-oszlopkromatográfia segítségével sikerült tiszta állapotban izolálni 36%-os hozammal (R® 0,3—0,4). A terc-butiészter-csoport trifluorecetsavas szolvolízise közel kvantitatív hozammal megvalósítható [op,: 95— 97° (bomlik); R] 0,32—0,43], 4. példa H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH-Mbh.(COOH)2 szintézise 1. lépés: Z-Pro-NH-Mbh 5 31,6 g (127 mmól) karbobenzoxi-prolinamidot és 34,2 g (140 mmól) 4,4'-dimetoxi-benzhidrolt feloldunk 320 ml jégecetben, és az oldatot 0,7 ml tömény kénsav hozzáadása után 3 napon keresztül állni hagyjuk. A reakcióelegyet 5 liter vízbe öntjük, és az emulziót etil-10 acetáttal kivonatoljuk. Az etilacetátos oldatokat egyesítjük, majd 5%-os nátrium-hidrogén-karbönát-oldattal és vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot diizopropiléterrel eldörzsöljük, szűrjük és éterrel mossuk. 49,56 g (82,5%) védett prolin-15 amidot kapunk, kapunk. Op.: 119—121°; R,1 0,7—0,8. 2. lépés: H-Pro-NH-Mbh.(COOH)2 34,18 g (72 mmól) védett prolinamidot (4. példa 1. lépés) 350 ml metanolban szuszpendálunk, és csontszenes palládium katalizátor hozzáadása után hidrogé-20 nézzük. A katalizátort kiszűrjük, az oldathoz 6,5 g (72 mmól) vízmentes oxálsavat adunk és szárazra pároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és éterrel mossuk. 29,3 g (91,5%) terméket kapunk. Op.: 201—202°; R6 S 0,42—0,52. 25 3. lépés: Z-Thr-Pro-NH-Mbh 16,64 g (38,65 mmól) prolinamid-származékot (4. példa, 2. lépés) és 10,84 ml (77,3 mmól) trietilamint feloldunk 75 ml dimetilformamidban, és a 2. példa 4. lépésében leírt módon acilezzük 23,25 g (46,4 mmól) 30 karbobenzoxi-treonin-pentaklórfenilészterrel 5,15 ml (46,4 mmól) N-metil-morfolin adagolása mellett. A reakcióelegyet bepároljuk, majd a maradékot feloldjuk 240 ml etilacetátban, vízzel, 1 n citromsavval és ismét vízzel mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk és be-35 pároljuk. A kristályos maradékot eldörzsöljük diizopropiléterrel, szűrjük és diizopropiléterrel mossuk. 18,77 g (84,3%) védett dipeptidamidot kapunk. Op.: 129—131°; Rf 3 0,71—0,81. 4. lépés: H-Thr-Pro-NH-Mbh.(COOH)2 40 18,77 g (32,3 mmól) védett dipeptidamidot (4. példa, 3. lépés) és a 2,94 g (32,6 mmól) vízmentes oxálsavat feloldunk 280 ml metanolban, és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, majd a maradékot 45 etanol-benzol-elegyben újra oldjuk és ismét bepároljuk. Végül a párlási maradékot éterrel kristályosítjuk, a kristályos anyagot szűrjük és éterrel mossuk. 16,45 g (95%) végterméket kapunk. Op.: 80° (bomlik); Rf 0,43—0,53. 5. lépés: Z-Gly-Thr-Pro-NH-Mbh 50 14,08 g (26,45 mmól) dipeptidamid-oxalátot (4. példa, 4. lépés) szuszpendálunk 50 ml dimetilformamidban, majd hozzáadunk 5,88 ml (52,9 mmól) N-metil-morfilint és 8,52 g (27,8 mmól) karbobenzoxi-glicin-N-hidroxi-szukcinimidésztert. A reakcióelegyet szobahőmérsék-55 léten egy napig állni hagyjuk, majd bepároljuk. A maradékot feloldjuk 170 ml etilacetátban és mossuk vízzel, 1 n sósavval vízzel, 5%-os nátrium-hidrogénkarbonátoldattal és ismét vízzel. Az etilacetátos oldatot nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk, a maradékot éterrel 60 eldörzsöljük, szűrjük és éterrel mossuk. 13,92 g (83%) védett tripeptidamidot kapunk. Op.: 67—69°; R? 0,68— 0,78. 6. lépés: Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NH-Mbh 15,52 g (24,5 mmól) védett tripeptidamidot (4. példa, 65 5. lépés) és 2,46 g (25 mmól) vízmentes oxálsavat fel-5
