166407. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fokozottan vízoldékony peptidamidok és azok származékainak előállítására
11 166407 12 oldunk 150 ml dimetilformamidban, és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és az oldatot kb. 50 ml-re betöményítjük (a szabad N-terminálisú védett tripeptidamid Rf értéke 0,4—0,5). Az oldathoz előbb 5,55 ml (50 mmól) N-metil-morfolint és 11,95 g (24,5 mmól) karbobenzoxi-szerin-panteklórfenilésztert, majd fél óra alatt 5 részletben összesen 2,72 ml (24,5 mmól) N-metil -morfolint adunk. Ezután a reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, majd bepároljuk. A maradékot feloldjuk 160 ml etilacetátban, és mossuk vízzel, 5%-os nátrum-hidrogénkarbonát-oldattal, vízzel 1 n sósavval és ismét vízzel, majd nátriumszulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és éterrel mossuk. 13,92 g (79%) védett tetrapeptidamidot kapunk. Op.: 86—90°; R4 0,45—0,55. 7. lépés: H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH-Mbh.(COOH)2 15,55 g (21,1 mmól) védett tetrapeptidamidot (4. példa, 6. lépés) és 2 g (22,1 mmól) vízmentes oxálsavat feloldunk 160 ml metanolban, és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a maradékot éterből kristályosítjuk. A kristályos anyagot szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 13,37 g (93,8%) szabad N-terminálisü védett tetrapeptidamid-oxátot kapunk. Op.: 90—95°; Rf 0,3—0,4. 5. példa Pyr-His-Pro-NH2 -CH 3 COOH szintézise 1. lépés: Z-His(Z)-OTCP* 33,0 g (72 mmól) dikarbobenzoxi-hisztidin-metanolátot feloldunk 100 ml kloroformban, az oldatot szárazra pároljuk, majd a maradékot feloldjuk 70 ml kloroformban, hozzáadunk 15,7 g (79,2 mmól) 2,4,5--triklórfenolt és 0° hőmérsékleten 14,69 g (72 mmól) diciklohexilkarbodiimidet. A reakcióelegyet egy órán át 0°-on keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és az oldatot bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk, majd a nyersterméket etilacetát-petroléter elegyből kristályosítjuk. 28,5 g (65,5%) védett hisztidin-2,4,5-triklórfenil-észtert kapunk. Op.: 109—112°; Rj 0,75—0,85. 2. lépés: H-His-Pro-NH-Mbh.2(COOH)2 4,3 g (10 mmól) védett prolinamid-oxalátot (4. példa, 2. lépés) szuszpendálunk 10 ml dimetilformamidban,' és keverés közben hozzáadunk 2,4 ml (20 mmól) trietilamint és 6,02 g (10 mmól) védett hisztidin aktív észtert (5. példa, 1. lépés). A reakcióelegyet szobahőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk 60 ml etilacetát és 10 ml víz elegyében. Az etilacetátos fázist vízzel mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, majd az éter dekantálása után n-hexánnal is eldörzsöljük. A csapadékot szűrjük és n-hexánnal mossuk. 6,3 g (84,5%) védett dipeptidamidot kapunk (R1 0,40—0,45). Az anyagot 50 ml metanolban feloldjuk, és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után a metanolos oldathoz 1,52 g (16,9 mmól) vízmentes oxálsavat adunk és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot víz* OTCP=2,4,5-triklórfenoxi mentes éterrel kristályosítjuk, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 5,0 g (90%) terméket kapunk. Op.: 122—124°; Rf 0,25—0,35. 3. lépés: Z-Pyr-His-Pro-NH-Mbh 5 5,0 g (7,6 mmól) szabad terminálisú védett dipeptidamid-oxalátot (5. példa, 2. lépés) és 4,27 ml (30,5 mmól) trietilamint feloldunk 15 ml dimetilformamidban, majd hozzáadunk 3,38 g (7,6 mmól) karbobenzoxi-piroglutaminsav-2,4,5-triklórfenilésztert. A reakcióelegyet éj-10 szakán át állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk. A párlási maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és éterrel mossuk. A kapott terméket 12 ml metanolban forrón oldjuk, csontszénnel derítjük, szűrjük, az oldathoz zavarodásig vizet adunk, majd jégszekrény-15 ben hűtjük. A kristályos anyagot szűrjük, kevés hideg vízzel mossuk és szárítjuk. 3,85 g (70%) védett peptidamidot kapunk. Op.: 127—128°; Rf 0,6—0,65. 4. lépés: Pyr-His-Pro-NH2 • CH3 COOH 3,62 g (5 mmól) védett tripeptidamidot (5. példa, 20 3. lépés) feloldunk 10 ml trifluorecetsavban, majd 1 ml anizol hozzáadása után 1 órán át forraljuk. Az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük és éterrel hígítjuk. A kivált terméket szűrjük, éterrel mossuk, majd szárítás után feloldjuk 25 ml metanolban. Az oldathoz adunk 18 ml 25 Amberlite IR 4B acetát-ciklusú ioncserélőgyantát és 2 órán keresztül keverjük. A gyantát kiszűrjük és 0,06 n ecetsavval mossuk. A metanolos oldatot és a mosófolyadékot egyesítjük és bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és 30 szárítjuk. 1,9 g (90%) tripeptidamid-acetátot kapunk, mely fehér, higroszkópos, mikrokristályos anyag. Rf 0,25—0,35 [n-butanol-ecetsav-etilacetát-víz (1:1:1:1) rendszerben]; MD— 65,7° (c = 1, vízben); az irodalmi érték: (— 65,5°). 35 Aminosavanalízis: Glu = 1,00, His = 1,02, Pro = 1,03, NH3=0,92. 40 6. példa Pyr-His-Pro-NH2 előállítása Tbh-szubsztituens alkalmazásával 1. lépés: 2,4,2',4'-tetrametoxi-benzofenon 45 55 g (300 mmól) 2,4-dimetoxi-benzoesavat és 45 g (350 mmól) rezorcin-dimetilétert elkeverünk 210 ml polifoszforsavval, s vízfürdőn melegítjük 10 percig. Ezután a keletkezett oldatot jégre öntjük, majd 2 óra állás után a kivált kristályokat kiszűrjük. Szűrőn mos-50 suk 2 x 300 ml vízzel, 2 x 300 ml 5%-os nátrium-hirdogén-karbonát-oldattal és ismét vízzel, addig amíg a mosó-folyadék semleges lesz. A nedves anyagot etanol-víz-elegyéből átkristályosítjuk; 45 g (91%) 2,4,2',4'tetrametoxi-benzofenont kapunk. Op.: 134—136 C°. 55 2. lépés: 2,4,2',4'-tetrametoxi-benzofenon-oxim 30,2 g (100 mmól) 2,4,2',4'-tetrametoxi-benzofenont, 19 g (264 mmól) hídroxi-ammónium-kloridot és 21,4 ml (264 mmól) piridint feloldunk 150 ml vízmentes etanolban, majd három órán át forraljuk. Az oldatot betö-60 ményítjük csökkentett nyomáson, a maradékot feloldjuk 200 ml kloroformban és mossuk 200—200 ml vízzel, 2%-os citromsav-oldattal, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd ismét vízzel. Ezután a kloroformos oldatot nátrium-szulfáton megszárítjuk 65 és bepároljuk csökkentett nyomáson. A maradék olajat 6
