166407. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fokozottan vízoldékony peptidamidok és azok származékainak előállítására

166407 8 folinnal semlegesítjük. Ezután hozzáadunk 3,13 g (4,025 mmol) H-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-OMetrifluoracetátot (op.: 185° (bomlik); Rj 0,30—0,45) és 0,447 ml (4,025 mmól) N-metil-morfolint 17 ml dimetilformamidban oldva. A reakcióelegyet 1 órán át —10° on és 2 órán át 0°-on keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot 1 n citromsavval eldörzsöljük, szűrjük, mossuk 1 n citromsavval, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal, vízzel, etilacetáttal és éterrel. 4,95 g nyersterméket kapunk, melyet 350 ml 70%-os metanollal forralunk, a szuszpenziót hűtjük, szűrjük és metanollal, majd éterrel mossuk. 4,15 g (73,3%) védett dekapeptidésztert kapunk. Op.: 234° (bomlik); Rf 0,38—0,52. A megfelelő Asn-származék esetében a nyersterméket 15%-os konyhasó-oldattal csapjuk ki a reakcióelegyből, majd 50%-os metanolból való átoldással tisztítjuk. 46%-os hozammal kapjuk a védett dekapeptidésztert [op.: 215° (bomlik); Rf 0,25—0,42]. 8. lépés: BOC-Cys(Acm)-Ser-Asn(Mbh)-Leu-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-OH 4,15 g (2,81 mmól) védett dekapeptidésztert (1. példa, 7. lépés) feloldunk melegen 90 ml piridin és 30 ml víz elegyében. Szobahőmérsékletre hűtve az oldatot 2,81 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá, 3 órán át keverjük, majd bepároljuk. A maradékot 1 n citromsavval eldörzsöljük, szűrjük és citromsavval, vízzel, majd etilacetáttal mossuk. 3,83 g (93,2 %) nyersterméket kapunk, amelyet 200 ml 65%-os metanollal kifőzünk, majd hűtés után szűrjük, 65%-os metanollal és éterrel mossuk. 3,45 g (83,7%) védett dekapeptidet kapunk. Op.: 225°; Rf 0,38—0,53. A megfelelő Asn-származék előállításánál a nyerstermék tisztítása sem különféle oldószerekből való átoldással, sem szilikagél-oszlopkromatográfiaval nem sikerült. 2. példa Z-Arg(N02

)-Thr-Asn(Mbh)= Thr-Gly-OH szintézise 1. lépés: Z-Thr-Gly-OMe 43,45 g (100 mmól) karbobenzoxi-treonin-diciklohexilammónium-sót feloldunk 200 ml kloroformban, mely 1,11 ml (10 mmól) N-metil-morfolint is tartalmaz. Keverés közben — 10°-on az oldathoz csepegtetünk 13,20 ml (100 mmól) klórszénsav-izobutilésztert, majd 8 perc keverés után ugyancsak — 10°-on az alábbi oldatot adjuk hozzá: 13,62 g (110 mól) glicinmetilészter-hidrokloridot és 12,1 ml (110 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 100 ml kloroformban, és az oldatokat — 10°-ra hűtjük. Az oldatok egyesítése után a reakcióelegy hőmérsékletét hagyjuk fokozatosan 0°-ra emelkedni, 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a kivált sók kiszűrése után az oldatot bepároljuk. A maradékot feloldjuk 300 ml etilacetátban, és mossuk 1 n kénsavval, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátoldattal és ismét vízzel, majd nátrium-szulfánton szárítjuk és bepároljuk. A kristályos maradékot diizopropiléterrel eldörzsöljük és szűrjük. 24,93 g (77%) védett dipeptidésztert kapunk. Op.: 107—109°; R? 0,4—0,5. 2. lépés: H-Thr-Gly-OMe.(COOH)2 24,93 g (77 mmól) védett dipeptidésztert (2. példa, 1. lépés) és 10,4 g (115,5 mmól) vízmentes oxálsavat feloldunk 250 ml metanolban, és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A katalizátort kiszűrjük és az oldatot bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és éterrel mossuk. 21,58 g (100%) 5 dipeptidészter-oxalátot kapunk. Op.: 153° (bomlik); Rí 0,3—0,4. A megfelelő dipeptid-terc-butilészter-oxalátot-karbobenzoxi-treoninra számolva — 71,8% hozammal kapjuk azonos kísérleti körülmények között. [Op.: 142° 10 (bomlik); Rf 0,47—0,57). 3. lépés: Z-Asn(Mbh)-Thr-Gly-OMe 2,46 g (5 mmól) Z és Mbh-val aszparagint és 0,555 ml (5 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 7 ml dimetilformamidban, és — 10°-ra hűtve előbb 0,66 ml (5 mmól) 15 klórszénsav-izobutilésztert, majd 8 perc keverés után az alábbi oldatot adjuk hozzá: 1,47 g (5,25 mmól) dipeptidészter-oxalátot (2. példa, 2. lépés) és 1,17 ml (10,5 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 3 ml dimetilformamidban és — 10°-ra hűtjük. Az oldatok egyesítése 20 után a reakcióelegy hőmérsékletét fokozatosan 0°-ra hagyjuk emelkedni, 1 órán át 0°-on keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, miközben géllé alakul. A reakcióelegyet 0,25 n kálium-szeszkvikarbonáttal hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük és 25 előbb a fenti oldattal, majd vízzel, 1 n citromsav-oldattal és ismét vízzel mossuk. 2,78 g nyersterméket kapunk, melyet 30 ml metanollal kifőzünk. A szuszpenziót hűtjük, szűrjük, majd a csapadékot hideg metanollal és éterrel mossuk. 2,38 g (71,2%) védett tripeptidésztert 30 kapunk. Op.: 223° (bomlik); R3

{

0,6—0,7. Karbobenzoxi-aszparagin-2,4,5-triklórfenilészterből kiindulva a megfelelő Z-Asn-Thr-Gly-OtBu 62,1% hozammal keletkezik [op.: 178° (bomlik); R? 0,6—07]. 4. lépés: Z-Thr-Asn(Mbh)-Thr-Gly-OMe 35 24,03 g (36 mmól) védett tripeptidésztert (2. példa, 3. lépés) 480 ml dimetilformamidban hidrogénezünk csontszenes palládium katalizátor jelenlétében. A katalizátor kiszűrése után az oldatot kb. 200 ml-re töményítjük és hozzáadunk 19,85 g (39,6 mmól) karbo-40 benzoxí-treonin-pentaklórfenilésztert, majd keverés közben, 5 részletben, fél óra alatt összesen 4,4 ml (39,6 mmól) N-metil-morfilint. A reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, majd 50 ml-re töményítjük és 2 liter éterbe öntjük. A kivált csapadékot szűrjük, éterrel mossuk és 45 szárítjuk. 26,8 g (97,1%) védett tetrapeptidésztert kapunk. Op.: 202—206°; Rf 0,35—0,45. A megfelelő Z-Thr-Asn-Thr-Gly-OtBu-t hasonló kísérleti körülmények között 64,5% hozammal kapjuk. A végterméket akkor sem sikerült egységes állapotban 50 izolálni, ha a kondenzációhoz tiszta, kristályos H-Asn-Thr-Gly-OtBu.(COOH)2

-t használtunk fel [op.: 178— 181°; Rf 0,43—0,60 (főkomponens)]. 5. lépés: H-Thr-Asn(Mbh)-Thr-Gly-OMe 26,0 g (33,9 mmól) védett tetrapeptidésztert (2. példa, 55 4. lépés) 400 ml dimetilformamidban oldunk és csontszenes pelládium katalizátor hozzáadása után hidrogénezünk. A katalizátor kiszűrése után az oldatot bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 19,75 g (92,2%) szabad N-termi-60 nálisú védett tetrapeptidésztert kapunk. Op.: 192—194° (bomlik); Rf 0,35—0,45. A megfelelő H-Thr-Asn-Thr-Gly-OtBu oxalát formájában is olajos termék (Rf 0,15—0,25). 6. lépés: Z-Arg(N02

)-Thr=TAsn(Mbh)-Thr-Gly-OMe 65 1,85 g (5,24 mmól) Z és N02

-val védett arginin, 4