166084. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(amino-adipoil)-amido- 3- acetoximetil- CEF- 3-EM- 4-karbonsav elkülönítésére vizes közegből kinolinsó-képzéssel

3 166084 4 létként használható más, erősebb baktériumellenes hatású antibiotikumok előállításakor. A találmány szerinti eljárással a cefalosporin C elkülöníthető a vizes fermentléből, továbbá részlegesen tisztított tenyészléből és „gyanta eluátum"-okból is, mégpedig a 7-aminoadipoilcsoport hasítására végzett reakció foganatosítása előtt. A leírásban a „cefalosporin C" meghatározás a fermentáció során keletkező összes cefalosporin C-hez hasonló vegyületre, mint például a dezacetilcefalosporin C-re, vonatkozik. A 3 160 631 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban ismertetett eljárás szerint a vízben oldott cefalosporin C-nátriumsót nátriumhidrogénkarbonáttal és acetonnal kezelik, 0 °C hőmérsékleten. A terméket ezután acetonban benzoil-kloriddal kezelik. A keletkező reakcióelegyet kloroformmal extrahálják, savazzák, és az N-acilcefalosporin C-t metilizobutilketonnal extrahálják. Az N-acetildialkilcefalosporin C-észtereket a találmány szerint olyan eljárással különítik el, amelyben többször szerves oldószereket használnak. A 3 234 223 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint a 7-aminocefalosporánsav előállítására olyan cefalosporin C-t használnak, ahol az aminocsoport 2,4-dinitrofenil-csoporttal védett. Nem ismertetik azonban a leírásban a 2,4-dinitrofenilcefalosporin C kiindulási vegyület előállítását. A 3 467 654 számú Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírásban ismertetett eljárás szerint a cefalosporin C-t tartalmazó szűrt tenyészlevet acetonnal kezelik, amikor kicsapódnak a szennyezőanyagok. A tisztított tenyészlevet anioncserélő gyantán kromatografálják, az abszorbeálódott cefalosporin C-t savas pH-jú pufferral eluálják. Az eddig ismert eljárások szerint tehát a cefalosporin C-t vagy ennek származékait szerves oldószeres extrakciós lépésekkel különítik el a tenyészléből. Az ilyen eljárások során az emulzióképződés és az oldószer-visszanyerés minden esetben nehézségeket okoz. Esetenként oldószerelegyeket, például etilacetátot és etanolt vagy izopropanolt használnak. Előnyös N-acilcefalosporin C extrakciós oldószer a ciklohexanon, azonban ipari méretekben emulziókeletkezés miatt nehézségek lépnek fel. Ügy találtuk, hogy a cefalosporin C elkülönítésekor a szerves oldószeres extrakciós lépés elhagyható. Így a szerves oldószerek használatakor jelentkező emulzióképződési és oldószer-visszanyerési nehézségek megszűnnek. Az eljárás rövid és kevesebb eszközt igényel. A találmány szerinti eljárással előállított termék minősége jobb mint az eddig ismert eljárásokkal előállított termékeké (N-acilcefalosporin C), ugyanakkor a szerves oldószeres extrakciós eljárásokkal összehasonlítva, a találmány szerinti eljárással a kitermelés is fokozható. A találmány szerinti eljárás előnyös kivitelezési változata szerint úgy járunk el, hogy a cefalosporin C-t tartalmazó vizes elegyet az I általános képletű, ahol R 2—5 szénatomos alkilvagy 1—5 szénatomos halogénalkilcsoport és R' 1—5 szénatomos alkil- vagy 1—5 szénatomos halogénalkilcsoport, ahol a halogénalkilcsoportok-5 ban a halogénatom előnyösen klór- vagy brómatom, savanhidriddel elegyítjük, amikor 0 °C és 30 °C közötti hőmérsékleten, pH 7 és 11 között N-acilcefalosporin C [b) lépés] keletkezik. A termék N-acilcsoportja a savanhidridből származik. 10 A c) lépésben a b) lépés során kapott elegyhez az N-acilcefalosporin-C mennyiségéré vonatkoztatva moláris feleslegben kinolint, izokinolint vagy ekvivalens mennyiségű bázist adunk. Erőteljesen keverjük a reakcióelegyet, majd pH-ját 15 savas vegyülettel 2,0 és 3,5 közé állítjuk be [(d) lépés]. A savas pH-jú elegyet 0 °C és 30 °C közötti hőmérsékleten tartjuk, amikor 1 óra vagy rövidebb idő alatt kristályosodási folyamat indul [(e) lépés]. Ezt követően a vizes oldatból 20 rendszerint monohidrátként kikristályosodott N-acilcefalosporin C-kinolinsót elkülönítjük [(f) lépés]. A cefalosporin C-t tartalmazó vizes elegy alatt a továbbiakban fermentlevet értünk, ezt a meg-25 felelő pH-n és szűrési segédanyagok adagolása után szűrhetjük. Ezt a továbbiakban kezeletlen tenyészlének nevezzük. A cefalosporin C-t tartalmazó vizes oldatot töményíthetjük vagy metanollal kezelhetjük. Ezt azt elegyet a továbbiak-30 ban részlegesen kezelt tenyészlének nevezzük. A találmány szerinti eljárás során kezelt cefalosporin C-tartalmú vizes oldat ioncserélő gyantáról eluált (további tisztítás) cefalosporin C-oldat is lehet. Ez utóbbi vizes oldatot cefalosporin C 35 „gyanta eluátom"-nak nevezzük. A cefalosporin C-t tartalmazó vizes oldat előkezelése és tisztasága határozza meg a cefalosporin C aminocsoport jának acilezésére használt savanhidrid menynyiségét. Ha az acilezést kezeletlen tenyészlében 40 végezzük, úgy cefalosporin C-mólonként 8—9 mól savanhidridet kell adagolnunk. Ha töményített, részlegesen kezelt tenyészlében acilezünk, úgy a cefalosporin C 1 móljára vonatkoztatva 4—6 mól savanhidridet adagolunk. Ha 45 „gyanta eluátum"-ot kezelünk, előnyösen 1,5— 3,0 mól savanhidridet adagolunk cefalosporin C-mólonként. Az acilezést előnyösen például alifás savanhidriddel, például propionsav-, vajsav-, valerián-50 sav- vagy kapronsavanhidriddel, vagy alifás, halogénezett vegyes savanhidriddel, például klórecetsavas ecetsavanhidriddel, klórecetsavas propionsavanhidriddel, brómecetsavas propionsavanhidriddel, vagy halogénezett alifás savanhidri-55 dekkel, például klórecetsavanhidriddel, diklórecetsavanhidriddel, brómecetsavanhidriddel, klórpropionsavanhidriddel, klórvaj savanhidriddel és hasonlókkal végezzük. A találmány szerinti eljárás első lépése az 60 acilezési reakció, amit pH 7 és pH 11, előnyösen pH 8,5 és pH 9,5 között végzünk. A reakrióelegy pH-ját az acilezési reakció alatt állandó értéken tartjuk, ugyanis ez a reakció során felszabaduló sav jelenléte miatt csökken. A reakcióelegy pH-65 ját előnyös pufferral, például nátriumborát vagy 2