166018. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nitrokinazolinon-származékok előállítására

166018 10 l-(2,2,2-trifluoretil)-4-fenil-6-nitro-2(lH)-kinazolinon, op.: 195-196 C°, l-(2,2,2-trifluoretil)-4-(m-nitrofenil>6--nitro-2(lH)-kinazolinon, op.: 205-206 C°, 1 -(2-dietilaminoetil)-4-fenil-6-nitro-2( 1H> -kinazolinon, barna színű olaj, 1 -(2-piperidinoetil)-4-fenil-6-nitro-2( 1H)-kinazolinon, op.: 106-107 C°, l-(2-morfolinoetil)-4-fenil-6-nitro-2(lH)•kinazolinon, op.: 80 C°, l-(2-dietilkarbamoilmetil)-4-fenil-6-nitro-2(lH)-kinazolinon, op.: 150,5-151 C°, l-pirrolidinokarbonilmetil-4-fenil-6-nitro-2( 1 H)-kinazolinon, l-tetrahidrofurfuril-4-fenil-6-nitro-2(lH)-kinazolinon, op.: 149-150 C°, l-tetrahidropiran-2-il-metil-4-fenil-6-nitro-2(lH)-kinazolinon, op.: 185-186 C°, 1 -furfuril-4-fenil-6-nitro- 2( 1 H)-kinazolinon, op.: 189-190 C°, l-(2-tenil)-4-fenil-6-nitro-2(lH)-kinazolinon, op.: 219-220 C°, l-(2-piridilmetil)-4-fenil-6-nitro-2(lH)-kinazolinon, op.: 175-176 C°. 2. példa 6,74 g l-(2,2,2-trifluoretil)-4-fenil-2(lH)-kinazolinont 20 ml tömény kénsavban oldunk és ehhez az oldathoz 3 ml füstölgő salétromsavat és 4 ml tömény kénsavat csepegtetünk jégfürdőben történő hűtés közben. Az elegyet azután szobahőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük, majd keverés közben 400 g zúzott jégre öntjük. Fehér csapadék képződik, ezt szűréssel elkülönítjük, vízzel mossuk és megszárítjuk. így 7,2 g l-(2,2,2-trifluoretil)-4-(m-nitrofenil)-6-nitro-2(lH)-kinazolinont kapunk, amely acetonból történő átkristályosítás után 205—206 C°-on olvadó fehér amorf port képez. 3. példa 10 15 20 25 30 35 40 1,22 g l-(2,2,2-trifluoretil)-4-fenil-2(lH>kinazolinon 2 ml tömény kénsawal készített oldatához hűtés közben hozzácsepegtetjük 0,5 g káliumnitrát 45 1 ml tömény kénsawal készített oldatát. Az elegyet 0C° alatti hőmérsékleten 10 óra hosszat keverjük, majd jégre öntjük, ammóniával meglúgosítjuk és kloroformmal extraháljuk. Az elkülönített kloroformos kivonatot vízzel mossuk és vízmentes 50 nátriumszulfáttal szárítjuk, majd az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk. Eluálószerként 1,1,1-triklóretánt alkalmazunk és az eluátumból l-(2,2,2-trifluoretü)-4-fenil-6-nitro-2(lH)-kinazoli- 55 nont kapunk, amely 199-200 C°-on olvad. Hozam: 0,8 g. Általános módszerként az úgynevezett kétszeres hígításos módszert alkalmaztuk. A csirke-embrió fibroblast sejtekből a szokásos módon egysejtes réteget képeztünk, a 10-11 napos csirke-embrió tripszinnel történő kezelése, majd Hanks-féle laktálbuminos tápközegen, amely 5% borjú-szérumot tartalmazott, 3 napig inkubáltattuk a sejt-kultúrát 37 C° hőmérsékleten, bedugaszolt kémcsőben. Ezután a sejt-tenyésztésre alkalmazott tápközeget kiöntöttük és 1.1X104 egység Vaccinia-vírus IHD törzset vittünk rá az egyes kémcsövekben levő kultúrákra. A vírussal kezelt egysejtes sejtréteghez 2% borjú-szérumot tartalmazó Eagle-féle laktalbumin-tápközeget adtunk és a vizsgált vegyületeket adtuk ehhez a készítményhez megfelelő koncentrációban (az alkalmazott koncentrációkat az alábbi I. táblázatban szereplő értékeknek megfelelő nagyságrendben választottuk meg). A kultúrát 37 C° hőmérsékleten 3 napig inkubáltattuk, majd mikroszkóppal megfigyeltük a mutatkozó citopatogén hatásokat. A vizsgált vegyületek vírus-ellenes aktivitását a mcg/ml egységekben kifejezett minimális gátló koncentrációban (MIG), toxikus hatásukat pedig az ugyancsak mcg/ml egységekben kifejezett minimális toxikus koncentrációban (MTK) adtuk meg. Az e kísérletek során kapott eredményeket az alábbi I. táblázatban foglaltuk össze. A táblázatban összehasonlításul megadtuk az ismert metizazonnal ugyanilyen módot kapott értékeket is, a táblázat adataiból világosan kitűnik, hogy valamennyi, a táblázatban szereplő és a találmány szerint előállított új vegyület a metizazonnal kedvezőbb kemoterápiás indexet, tehát MTK/MIG értéket mutat. I. táblázat Az új vegyületek hatása a Vaccinia-vírus szaporodására csirke-embrió fibroblast-sejtkultúrában. Vegyület MIG MTK Kemoterápiás sorsz. Mg/ml Mg/ml index MTK/MIG 4. példa 60 A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeknek a Vaccinia vírius szaporodására gyakorolt hatását csirke-embrió fibroblast-sejtkultúrán vizsgálj tuk. 65 1. 0,1 100 1000 2. 0,1 110 1000 3. 0,1 100 1000 4. 0,1 100 1000 5. 0,2 >100 >500 6. 0,2 50 250 7. 0,2 >100 >500 8. 0,25 5 20 9. 0,25 5 20 10. 0,6 25 40 11. 1,0 100 100 12. 1,25 >100 >80 13. 5,0 >100 >20 14. 5,0 >100 >20 15. 5,0 >100 >20 16. 5,0 >100 >20 17. 5,0 >100 >20 18. 5,0 50 10 19. 5,0 50 10 20. 5,0 50 10 Metizazon 5,0 20 4 5