165789. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-/gamma-amino-propil/-3-amino-karbazol előállítására és e vegyületet tartalmazó tesztcsíkok - glükóz enzimatikus kimutatására

165789 10 1,85%-os nátrium-alginát oldata 0,5 mólos (5,5 pH) foszfátpufferben szerves nátrium-szulfonát (Texapon P) glükóz-oxidáz (104 egység/mg) peroxidáz (63,1 egység/mg) o-tolidin 9-(7-amino-propil)-3-amino-karbazol 10 ml vízben oldva 6 ml metanolban oldva 35,0 g 1,0 g 5 0,114g 0,128 g io 0,2 g 0,026 g is Az alkotórészeket jól összekeverjük, majd PVC-fóliára 300 ju vastagságú rétegben felvisszük és 35 percig 60 C°-on szárítjuk. Glükóztartalmú vért a 20 reagensfóliára cseppentünk, 1 perc után letöröljük, így további 2 perc után a következő, hőmérséklettől nem függő színreakciót kapunk: 60 mg% glükóz — barnás vörös 25 120mg% glükóz - olív 180 mg% glükóz és ennél több — növekvő színmélységű zöld Az 1. ábra 20C°-on és 30C°-on kereskedelmi 30 remissziós fotométerrel mért kalibrációs görbét mutat. Azonos összetételű tesztfilmet készítünk azzal a különbséggel, hogy a film 0,026 g indikátor I 35 helyett 0,04 g 9-(etil)-3-amino-karbazolt tartalmaz. A film gyakorlatilag azonos színreakciót mutat, mely azonban a hőmérséklettől függ és ezért nem reprodukálható. 40 A 2. ábra a 20C°-on és 30C°-on felvett kalibrációs görbét mutatja, mely egymástól jelentősen különbözik. 3. példa Tesztfilm glükóz kimutatására vérben Alkotórészek: Poli-vinil-acetát-propionát diszperzió (Propiofan 70 D) 1,85%-os nátrium-alginát oldata 0,5 mólos (5,5 pH) foszfátpufferben nátrium-nonilszulfát 5 ml vízben oldva 45 50 glükóz-oxidáz (62,7 egység/mg peroxidáz (68,8 egység/mg) 10 ml vízben oldva 45,0 g 55 35,0 g 0,75 g 60 0,189 g 0,235 g 65 o-tolídin 2,5 ml acetonban oldva 0,6 g 9-(7-amino-propil)-3-amino-karbazol-dihidroklorid 2,5 ml vízben oldva 0,026 g Az alkotórészeket jól összekeverjük, majd PVC-vel rétegzett papírra 310 ju vastagságú rétegben felvisszük és 35 percig 60C°-on szárítjuk. A kezelés megfelel a 2. példában megadottaknak. A 20 C°-on és 30 C°-on remissziós fotométerrel mért kalibrációs görbe lényeges eltérést nem mutat. Színreakció: 60 mg% glükóz — rózsaszín-okker 120 mg% glükóz — olív 180 mg% glükóz és ennél több — növekvő színmélységű zöld. 53 diabetikus paciens vérvizsgálatánál a színreakciót tesztcsík-fotométerrel mértük, mely a hexokináz-módszerrel végzett glükózmeghatározással összehasonlítva 0,9857 korrelációs koefficienst adott. A standard-eltérés (2s)±15mg% glükóz. Gyakorlatilag azonos eredményt (r = 0,982, 2s = ±17mg) kaptunk a következő összeállítású tesztümmel: Poli-vinil-acetát-propionát diszperzió (Propiofan 70 D) 1,85%-os nátrium-alginát oldata 0,5 mólos (6,5 pH) foszfátpufferben ammónium-perfluor-oktanoát (Fluorad FC 126) 10 ml vízben oldva glükóz-oxidáz (62,4 egység/mg) peroxidáz (100 egység/mg) Kolanilsárga HR o-tolidin 9-(y-amino-propil)-3-amino-karbazol-dihidroklorid 10 ml vízben oldva 20 ml metanolban oldva 45,0 g 35,0 g 1,0 g 0,19 g 0,16 g 0,02 g 0,4 g 0,026 g 4. példa Tesztpapír glükóz kimutatására vizeletben Schleicher és Schüll 597 NF szűrőpapírt a következő összetételű oldattal átitatjuk és 50 C°-on szárítjuk. 1 mólos citrátpuffer (pH 5) 50,0 ml poli-vinil-pirrolidon (közepes mólsúly 12000) 0,1 g poli-vinil-pirrolidon (közepes mólsúly 40000) 0,1 g 9-(7-amino-propil)-3-amino-karbazol-dihidroklorid 3,12g glükóz-oxidáz (104 egység/mg) 0,3 g peroxidáz (63 egység/mg) 0,06 g vízzel feltöltve 100 ml-re 5